蛋白质等电点
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2023年3月20日发(作者：英文文章阅读)1
蛋白质的两性反应及等电点测定
I．蛋白质的两性反应
实验原理
构成蛋白质的许多氨基酸，虽然绝大多数的氨基酸与羟基成肽键结合，但总有一定
数量的氨基与羟基呈游离状态。因此蛋白质也和氨基酸一样是一种两性电解质，在酸性
溶液中作碱性解离，使蛋白质带正电荷；在碱性溶液中作酸性解离，使蛋白质带负电荷。
调节溶液的氢离子浓度，使蛋白质分子所带的正电荷和负电荷的强度相等，蛋白质
分子在这样的条件下既不向电场中的阳极移动，也不向阴极移动，这时溶液的pH，称
为蛋白质的等电点（pI）。体内各种蛋白质的等电点不同，但大多数接近于pH5.0，所以
在人体体液pH7.4的环境下，大多数蛋白质解离成阴离子，带负电。
蛋白质分子在酸性及碱性溶液中，因都分别带有相同的正电荷和负电荷，互相排斥，
不容易生成沉淀，但当溶液的酸碱度调节到蛋白质的等电点时，蛋白质颗粒上的净电荷
即为零，缺乏同电相斥的因素，因此很容易彼此结合而沉淀。
仪器设备
小试管、毛细滴管及试管架
试剂
1．0.5%酪蛋白液
2．0.01%溴甲酚绿指示剂
3．0.02NHCl溶液
4．0.02NNaOH溶液
+H+
+
OH－
NH
2
COO－+H
2
O
CHR
COOH
NH
2
CHR
COOH
NH
2
CHR
NH
3
+
CHR
COOH
2
实验操作
1．取一小试管，加0.5%的酪蛋白液20滴，加0.01%溴甲酚绿指示剂4滴，混匀。
此时溶液呈何色？说明什么？
2．以毛细滴管漫漫加入0.02NHCl溶液，随滴随摇，至有明显的大量的沉淀发生时，
此时溶液的pH接近与酪蛋白的等电点，观察溶液的颜色有何变化？
3．继续用0.02NHCl溶液滴入，沉淀为什么会逐渐消失？此时溶液的颜色有何变
化：说明什么？
4．如再滴加0.02NNaOH溶液至中和，为何又会出现沉淀。继续再滴碱液，为何
沉淀又会溶解？从溶液颜色的变化，说明什么？
II、酪蛋白的等电点的测定
实验原理
酪蛋白的等电点是4.7，利用蛋白质在等电点时溶解度最低的特性，配制不同氢离
子浓度的缓冲溶液，以观察蛋白质在此等溶液中的沉淀情况，可确定蛋白质的等电点。
仪器设备
中号试管、吸管及试管架
试剂
1．酪蛋白0.1N醋酸钠液：称取纯酪蛋白0.25克，加蒸馏水20ml及1.00NNaOH
溶液，摇荡使酪蛋白溶解；然后加1.00N醋酸溶液5ml，最后定量至50ml，混匀。
2．0.01N醋酸溶液
3．0.10N醋酸溶液
4．1.00N醋酸溶液
实验操作
1．取干燥而直径相近的中号试管7支，按下表准确加入各试剂：
3
试管号码1234567
pH3.53.84.14.75.35.65.9
蒸馏水2.43.23.01.52.753.38
1.00N醋酸1.60.8——————————
0.10N醋酸————4.04.0——————
0.01N醋酸——————）2.51.250.62
2．在每管内各加入酪蛋白0.1N醋酸钠液1ml，立即混匀，混匀后各管内溶液的pH，
即如上表所示。
3．静置30分钟，观察各管的浑浊度，以0、+、++、+++、++++表示之。根据
实验结果，指出哪一种pH是酪蛋白的等电点。