竞争性抑制
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2023年3月20日发(作者：实习报告心得体会)实验四酶的竞争性抑制作用
一、目的要求：
通过实验加深对酶的竞争性抑制作用的了解
二、实验原理：
与底物化学结构类似的抑制剂，能与底物竞争和酶活性中心的结合、抑制酶的活性，
这种类型的抑制为竞争性抑制。竞争性抑制的程度由抑制剂与底物相对浓度决定。如果
底物浓度不变，酶活性被抑制的程度随抑制剂的浓度增加而增强。反之，如果抑制剂浓
度不变，则酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。
本实验观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响。琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条
件下，可从加入的甲烯蓝褪色情况来观察。
COOHCOOH
︳︳
CH
2
琥珀脱氢酶CH
︳+甲烯蓝——————→‖+甲烯白
CH
2
CH
︳︳
COOHCOOH
三、实验材料
1、试剂：
（1）0.2mol/L琥珀酸：称取琥珀酸23.618g，用蒸馏水配成约600ml,用5mol/LNaOH调
pH至7.4，再加水至1000ml
（2）0.02mol/L琥珀酸：用0.2mol/L琥珀酸稀释10倍
（3）0.2mol/L丙二酸：称取丙二酸22.92g，用蒸馏水配成约600ml，5mol/LNaOH调pH
至7.4，再加水至1000ml
（4）0.02mol/L丙二酸：用0.2mol/L丙二酸稀释10倍
（5）0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取0.2mol/LNa
2
HPO
4
19ml，加蒸馏水至200ml
(6)0.02%甲烯蓝
（7）液体石蜡
2、器材
（1）小试管及试管架（2）吸量管（10ml*1）及滴管（8支）（3）研钵
四、实验方法
1、心肌匀浆的制备：取动物（鼠、猪等）心肌1g，置研钵中，剪碎，研磨成匀浆，再
加入0.1mol/L磷酸盐缓冲液10ml，磨匀，备用
2、取小试管5支并编号，按下表操作：
试剂管号1号2号3号4号5号
心肌匀浆
15151515
0.2M琥珀酸
555
0.02M琥珀酸
55
0.2M丙二酸
55
0.02M丙二酸
5
蒸馏水
520
甲烯蓝
22222
液体石蜡
55555
甲烯蓝褪色情况
加入液体石蜡后
时间记录
甲烯蓝褪色时间
记录
所用时间：
加入液体石蜡后，室温放置。观察各管甲烯蓝褪色情况。
五、结果处理
记录各管甲烯蓝褪色情况，并解释结果。
六、注意事项
1.心肌要用新鲜的
2.注意各种试剂加入的顺序，混匀各管已加入的试剂后马上加入液体石蜡
3.及时、仔细观察颜色变化
4．观察结果过程中，不要摇动试管，以免溶液与空气接触而使甲烯白重新被氧化变蓝
七、思考题
在此实验基础上，如何设计实验来观察“增加底物浓度，酶的竞争性抑制作用可以降低或
消除”的现象？