
人工合成肽 合成肽的反应式
五年级下册教学计划-读书主题的手抄报
2023年3月4日发(作者:胃痉挛自己会好吗)高中生物多肽合成笔记手写
人工固相合成多肽一般是从序列的C端向N端逐个添加氨基酸。
昂拓莱司生物的多肽合成是基于PeptideSyn技术平台的Fmoc或Boc
法的多肽合成(两种方法的合成步骤是相同的,只是α-氨基保护基的
脱除方式不同)。
这里以Fmoc保护策略法举例说明。合成由下列几个步骤组成:
①挂树脂:根据订单选用并称取相应量的树脂,投入反应器中
溶胀备用。
②去保护:Fmoc保护的柱子和单体必须用20%piperidine去除氨
基的保护基团。
③检测:检测是否已经把保护基去除,既是氨基是否已经裸露
出来。(昂拓莱司生物常用茚三酮作为检测试剂,若结果是阳性,则
判定氨基裸露)
④激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活
化的单体与游离的氨基反应交联,形成肽键。我们需要注意的是氨基
酸的投入量不是随意的。为保证肽链合成的准确性;氨基酸,缩合剂
以及碱是有一个比例的。这里提供一个参考比例。(规模(mol):
氨基酸:缩合剂:碱=1:3:3:6)
⑤检测:检测是否已经把所需氨基酸连上。结果是阴性,判定
氨基酸已经完全连上。
⑥循环:反复循环②-⑤直到合成完成。
⑦将合成的肽从树脂切割和去保护。(Fmoc策略用TFA(强酸)
即可将多肽从树脂上切下。)
固相合成肽链,为减少副反应的发生,选用的部分氨基酸的侧链
是用保护基团保护起来。但最终的成品只要肽链,既需要脱除保护基。
一般为了方便操作,根据肽链上的不同保护基预先配好切割液。(在
这里用昂拓莱司生物常用的其中一种切割液配比举例说明。E液配比:
87.5%TFA+5%茴香硫醚+2.5%纯水+2.5%苯酚+2.5%EDT)
⑧使用冰乙醚离心沉淀(至少要洗三遍);洗脱、冷冻干燥。
得出粗品进行MS检测和HPLC检测。