染色试剂
读书节手抄报内容-巴尔通体病
2023年2月19日发(作者：皖菜)即用型小鼠IL-1β免疫组化染色试剂盒
产品编号：QD82108
试剂的保存：短期于4℃保存，长期于-20℃保存。
工作原理
IL-1β，白介素1β。在免疫调节和炎症反应过程中起中心作用。类风湿、
结肠炎等病症也和IL-1β的产生过多有关。IL-1α和IL-1β有25%的同源性。
合成IL-1β的细胞很广泛，包括单核细胞、巨噬细胞、星形细胞、NK细胞、
角化细胞、内皮细胞等。两者合成时都是31KDa的前体，经剪切后成为
17.5KDa的成熟蛋白质。IL-1β前体在细胞内合成，并无生物学活性。被IL-1
β转化酶（ICE）剪切为成熟形态后排出到细胞外。
链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素
一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。
亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉
亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于
链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据研究，SP（StreptAvidin-Biotin
Complex）大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所
构成的复合物。
应用范围
适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡
包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。
试剂盒中内容
1.山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用
于组织切片的封闭。
2.二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体，
标记长臂生物素，生物素标记抗兔IgG。
：1ml（效价1：10，临用前用SP稀释液稀释10倍）。链酶亲和素-过
氧化物酶复合物。
用户自备试剂：
1.粘片剂APES或Poly-L-Lysine。
2.0.01MPBS，0.01M枸橼酸盐缓冲液。
显色试剂盒。
4.免疫组化染色程序的选择：
用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结
果。
石蜡切片染色程序:
1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱
58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。
2.切片常规脱蜡至水。
3.3%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸
馏水洗3次。
4.酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用
0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐
缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟
后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。
5.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。
6.适当稀释的一抗，37℃2小时左右或4℃过夜。PBS（pH7.2-7.6）洗
2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有
直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长
孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
7.加生物素化二抗,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。
8.滴加试剂SP,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。
显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C
试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应，时
间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时（阳性较强，背景较低），
即可终止反应（用蒸馏水洗涤切片）。
10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
注意事项：
1.如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—
0.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2
次，然后DAB显色。警告：DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范
措施。
2.热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、
TBS等多种缓冲液。
3.脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与
常规H.E脱蜡分开。
4.如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织
切片，需要进行封闭的特殊处理。
5.在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低，因此不得使
用过期的试剂盒，不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。