2024年3月22日发(作者：)
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第２６卷 黑龙江医学 Ｖｏ１．２６．Ｎｏ．１０ ２００２年第ｌ０期 ＨＥＩ ＬＯＮＧ ＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ Ｏｃｔ．２００２ ７３７ ・讲座・ 细胞移植的研究与应用 宋春芳 （哈尔滨医科大学第一临床医学院普外一科，黑龙江哈尔滨１５０００１） 作者简介：宋春芳，男，６１岁。１９６４年毕业于哈尔滨医科大学医疗系。现任哈尔滨 医科大学第一临床医学院普外科主任，主任医师，教授，博士研究生导师，卫生部细胞移 植重点实验室主任。担任国务院学位委员会全国医学专业学位教育指导委员会委员、 中华医院管理学会医疗技术应用管理委员会常委、黑龙江省医学会副会长。 几十年来，宋春芳教授一直从事外科临床、科研与教学工作，在普外科领域成绩卓 博士生导师宋春芳 著，是国内普外科知名度较高的专家。在腺体外科（甲状腺、乳腺、胰腺）、肝胆及胃肠疾 病的诊治方面具有很深的造诣。近ｌＯ年来主持细胞移植的研究，成功的进行了甲状旁腺细胞移植治疗甲状 旁腺机能低下，受到国内外的普遍关注。在国内外发表学术水平较高论文７０余篇。主编及主审著作５部。 培养硕士研究生３０名，博士研究生９名。 摘要：细胞移植是通过把有功能的细胞植入人体内，以替代因退变、损伤、基因缺陷或自身免疫而毁损的 细胞，从而达到治疗疾病的目的。近年来，细胞移植已经成为移植学研究中的一个新热点。为此，本文就细胞 移植在临床各领域的研究与应用作一综述。 关键词：细胞；移植 中图分类号：Ｒ６２２．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—５７７５（２００２）ｌ０—０７３７—０５ 随着肾脏、心脏和肝脏等器官移植的相继成功，加之生物 （ｃｈｆ—ＰＴＧ）细胞植入｝｛Ｉｙｒ患者肾周围脂肪囊内，以试图重建 技术高速发展的推动，人们己将更多的注意力转向细胞移植， 或增补钙一ＰＴＨ一钙关系轴的功能。结果表明，移植的ｃｈｆ— 以期通过把有功能韵细胞植入人体内，以替代因退变、损伤、 ＰＴＧ细胞能较好地存活，并通过有效地分泌ＰｒＨ维持受体内 基因缺陷或自身免疫而毁损的细胞，达到治疗疾病的目的。 钙磷代谢的稳定，｝｛Ｉｙｒ患者的症状也逐渐减轻至消失。 细胞移植与器官移植的共同点：同种异体移植后必然发 ｃｈｆ—ＰＴＧ细胞用于移植时有以下优点：（１）培养的ｃｈｆ— 生不同程度的排斥反应；被移植的细胞从供体到受体的全部 ＰＴＧ细胞分散、分布有利于细胞汲取养份，提高了细胞的成活 操作过程中始终保持着活力。然而，细胞移植与通常所说的 率，避免了组织块培养中存在的中心性坏死；（２）可以有效地 器官移植相比较，则有其自身的特点：①它不具有器官的正常 控制用于移植的ｃｈｆ—ＰＴＧ细胞的数量水平；（３）可以在细胞 外形及解剖结构，不再是一完整的器官，而是一细胞群，移植 生长功能状态最佳时进行移植，亦可经低温保存建立细胞库， 时常制成细胞悬液，无需吻合血管。’因此，移植是通过各种输 以备随时之需或匹配移植时机；（４）ｃｈｆ—ｇＩＧ细胞对缺血缺氧 注途径来实现的；②供体细胞在分离、纯化、制备和输注过程 的耐受性较高；（５）通过体外培养、冷冻、紫外线及∞ｃ０照射可 中，多有损伤和活力的丧失，为取得疗效，要做大数量高活力 以降低移植物的免疫原性，减轻移植后的排斥反应，还可降低 的细胞群团移植；③可在移植前对移植物进行体外修饰，以增 ｝Ⅱ —ＤＲ抗原的阳性表达，并能消除移植物中带有ＭＨＣ—ＩＩ 强其功能或降低免疫原性；④移植手术简单、安全、并发症少， 类抗原的过客淋巴细胞，改变移植物的表面抗原结构，提高移 即使移植物被排斥，也只导致移植物失活，而不会引起严重的 植物的成活率；（６）操作简单、实用性强、重复性好。 不良反应。 选择。肾脂肪囊内移植是由于肾脂肪囊是相对的免疫隔离 近年来，细胞移植已经成为移植学研究中的一个新热点。 区，将ｃｈｆ—ｇＩＧ细胞移植于该部位时可进一步减轻免疫排斥 正如澳大利亚移植专家Ｍｏｎａｃｏ教授所说：“肾移植己不再具 反应，延长移植物的存活时间。 有新闻价值，我们寄期望于细胞移植的进展”。为此，本文就 本文为６例患者实施了人胚胎甲状旁腺细胞移植。通过 细胞移植在临床各领域的研究与应用作一综述。 对移植前后血清钙及ＰｒＨ进行测定发现：移植前患者的ＰｒＨ ｌ甲状旁腺细胞移植 均较低（０～１．３６ｎｇ／Ｌ），但由于服用钙剂加以维持，使其血钙 甲状旁腺细胞的主要功能是分泌甲状旁腺素（ＰｒＨ），ＰｒＨ 仍维持一定水平（１．６ｍｍｏｌ／Ｌ）；移植后第３～４ｄ患者的血清钙 对维持人体内钙水平的稳定至关重要。正常情况下，细胞外 及ＰｒＨ均有显著升高，患者四肢及面部痉挛抽搐减轻，第６ｄ 液钙水平降低可引起ＰｒＨ的释放，后者可提高肾脏对钙的重 时血钙浓度达正常范围（２．２～２．６ｍｍｏｌ／Ｌ），第１４ｄ时血清ＰＴＨ 吸收而减少对磷的吸收；提高ｌ，２５二羟胆固醇的合成，从而 达正常范围（１３～５４ｎ Ｌ），患者症状基本消失。在随访的９～ 刺激骨释放钙离子及肠道吸收并主动转运钙离子至血液。多 ｌ２个月中，这２项指标基本稳定，症状无复发。… 种因素如炎症、肿瘤、遗传缺陷或甲状腺手术都可能造成甲状 这一研究利用了ｃｈｆ—ｇＩＧ细胞所具有的优点，并通过选 旁腺功能低下（Ｉ－ＩＰＴ），使ＰｒＨ分泌不足或生物活性降低，导致 择安全且免疫排斥反应低的部位，使移植细胞易存活生长并 钙一ＰｒＨ一钙关系轴功能的失调，从而使钙磷代谢紊乱，进而 表现出较好的功能。该方法简便安全，无痛苦，可反复应用， 引发低钙血症。 ． 易为患者接受，是一种较理想的治疗Ｉ－ＩＰＴ的新方法。目前为 以往的治疗常仅限于服用钙剂或二氢速变固醇（ＡＴｍ）， 进一步解决供体来源不足及免疫排斥，我们正在尝试进行异 效果不甚理想，且副作用较大。 种及微囊化甲状旁腺细胞移植的研究。 我们在对Ｉ－ＩＰＴ的大鼠进行同种异体甲状旁腺细胞。肾周 ２胰岛移植 围脂肪囊内移植成功的基础上，将培养的人胚胎甲状旁腺 近ｌ０年来，糖尿病发病率在世界各国急剧上升，已成为
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第２６卷 黑龙江医学 ｒ、 ！ｏＯ？ ７３８ ２００２年第ｌ０期 ＨＥＩ ＬＯＮＧ Ｊ［ＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡ１ 全球性的卫生保健问题。预计到２０１０年中国的糖尿病患病 率将达１４％，其中ｌ型糖尿病约占１０％～２０％。鉴于如此严 峻的现实，近年来世界各国都加大了对糖尿病治疗方而的研 究力度。 通过咦岛细胞移植来增加患者的咦岛素分泌细胞，可以 有效地控制糖代谢，减少和改善糖尿病的并发症，提高生命质 量，进而达到根治糖尿病的目的。同时，可以避免外源性胰岛 素治疗引起的低血糖和胰岛素抵抗。 对于已经丧失胰岛细胞功能的糖尿病患者，包括Ｉ型糖 尿病和部分Ⅱ型糖尿病患者，从理论上讲胰岛移植是比胰腺 移植更加合理的治疗方法。其理由为：（１）手术操作简单安 全，无处理外分泌的问题。尚无手术引起死亡的报道。使用 内窥镜经门静脉内直接注入胰岛细胞的方法，患者即日可恢 复出院；（２）便于体外修饰移植物。例如，利用基因工程的方 法增强胰岛细胞功能和抗免疫能力或降低免疫源性等。因 此，胰岛移植是治疗Ｉ型糖尿病的理想方法。 ２．１胰岛供体的来源与选择 在临床胰岛移植研究中，胰岛的供体主要为成人及胎儿 胰岛以及与人类具有亲缘关系的胎猪、新生猪或成年猪胰岛。 此外，转基因动物以及克隆器官亦是潜在的供体来源。 ２．２胰岛移植物的制备与移植 从获得供体胰腺到胰岛细胞分离与纯化的冷缺血时问需 控制在８ｈ以内。胰腺获取后，首先向胰管内灌注胶原酶（目 前使用Ｌｉｂｅ￣，Ｒｏｃｈｅ），用ｍｃｏｒｄｉＬ２］发明的自动胰岛分离装 置进行胰腺消化，使胰岛自胰腺外分泌组织中游离出来。在 此期问需要抽样观察胰岛的形态、游离程度和外分泌细胞脱 颗粒状态，以确定合适的消化时间。然后采用密度梯度离心 的方法进行胰岛的纯化。纯化剂主要为基于Ｅｃｏｌｌ的连续或 不连续密度梯度纯化液，其中以Ｅｕｒｏ—Ｆｉｃｏｌｌ效果最好，能显 著减少纯化过程中胰岛的损伤，提高胰岛的纯化效果。关于 成人胰岛的纯化装置，目前基本上均以大型细胞分离器 （Ｃｏｂｅ２９９１）进行胰岛纯化，Ｃｏｂｅ２９９１原用于外周血细胞分离， 将该分离器用于胰岛纯化不仅大大缩短了时间（仅为常规时 间的１／４），也减少了污染机会，有助于改善胰岛活力。１位健 康成人胰腺中包含大约１００万个胰岛，经过胰岛分离、纯化． 通常只能获得５０万个左右个胰岛．纯度约５０％～８０％。ｌ例 患者通常需要进行１次以上的移植才能有效地控制血糖。 目前，大多数移植中心均选择经门静脉肝内移植为最佳 移植途径，这是因为肝内血供丰富，有利于胰岛移植物存活， 而且移植物释放的胰岛素直接进入门静脉系统的方式符合胰 岛素分泌的生理途径，同时肝脏亦为相对免疫豁免器官。其 它可选择的移植部位多为一些潜在的具有相对免疫豁免特性 的部位，如肾包膜下、睾丸内、脑室内以及胸腺等，但由于这些 部位皆属于腔静脉回流系统．因而移植后对糖代谢的控制较 差。胰岛移植可与肾脏同时或在肾移植后进行。 ＩＴＲ的胰岛细胞移植原则为：①胰腺保存的冷缺血时问 ＜８ｈ；②门静脉内移植；③移植量＞６（Ｘ）０１ＥＱ／ｋｇ；④早期免疫 抑制剂应用，首选Ｔ淋巴细胞抗体。 ２．３胰岛移植所面临的问题 目前，胰岛移植需亟待解决２大难题：胰岛细胞来源不足 和移植后的免疫排斥反应。 ２．３．１胰岛细胞组织来源的扩充：我们面对的现实是人体胰 腺供给远远不能满足临床需要。因此，有学者开始寻找其它 的胰岛细胞来源。（１）异种移植（ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）：在许多异 种移植胰岛细胞供体中，猪胰岛可能最适合于作为糖尿病患 者的供体，其理由为：①猪胰岛素与人胰岛素的氨基酸排列最 接近，仅有１个氨基酸不同，已用于治疗Ｉ型糖尿病多年；② 猪的代谢特点，如血糖调定点等与人类相似；③组织来源广 泛：④从猪胰腺分离胰岛在技术上可能，且猪胰岛能够在人新 鲜血清组织培养中存活，增生。但是，猪胰岛细胞用于移植也 存在着许多问题尚待解决，如成年猪胰岛的高死亡率［主要为 细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）］以及胚胎或新生猪映岛组织的 、战热 （其并不能很快控制受体的血糖水平 ，ｊ外，绪组 内 曩 转录病毒，有可能传染给人类。随着免疫疗法，特别是免接隔 离技术的发展成熟，异种移植可塑成为组织替代疗法中的重 要途径；（２）扩增咦腺ｐ细胞及制造胰岛索分泌细咆株：尽莆 胰腺３细胞有一定的生长能力．世目前尚无体外扩增 细胞 的可行方法。人们对口细胞的生长渊 ，胚胎发育等进行了 大量的研究，希望通过对其生长机制的认识找到可能的体外 扩增口细胞的有效方法。目前认为．ＨＧＦ，ＩＧＦ—Ｉ，Ｇａｓｔｉｆｎ，ＴＧＦ —ａｌｐｈａ，ＥＧＦ，ＧＬＰ一１．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ等对Ｓ细胞生长发育有促 进作用；在转录水平上，ＩＰＦ一１（ＰＤＸ一１ ，Ｎｅｕｍｇｅｎｉｎ３，Ｂｅ＇ｔａ２ ／ Ｎｅ叽】Ｄ，Ｐ．＆Ｘ６，ＰＡＸ４， Ｆ等是胰腺内分泌细胞较为持异的转 录因子，其缺陷常可导致胰岛发育及功能的低下 啮街类的 研究结果提示，即使是成年胰腺导管上皮细胞甚至外分泌细 胞，仍具有增生、分化的潜能。胰腺导管细胞可以通过快速增 生（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）丧失其导管的表现型而转变为有多潜能ｆ 细 胞，在某些外界条件的刺激下可分化为胰岛细胞。随着实验 条件的完善，胰腺０细胞的体外扩增将会成为现实。 尽管干细胞（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌ１）在神经领域的研究取得了长足的 进展，但在胰岛细胞方面仍属实验阶段。近期的Ｎａｔ Ｍｅｄ报 道了从糖尿病前期小鼠的胰腺中提取胰岛干细胞，经过体外 培养诱导了ＰＤＸ一１，Ｒｅｇ，Ｂｅｔａ ２／Ｎｅｕｒｏ Ｄ等口细胞发育分化｝１ｊ 关基因的表达以及胰岛素分泌。在移植给Ｉ型糖尿病小鼠 （ＮＯＤ）后有效地控制了血糖。重要的是这些体外培养的同种 异体细胞逃避了自身免疫这个Ｉ型糖尿病的主要病理损饬， 提示这一领域有广阔前景。 基因工程的方法使修饰细胞功能成为可能。例如，可以 使胰岛素基因表达在原本不产生胰岛素的细胞，使这些细咆 不仅可以产生胰岛素，而且对不同刺激物产生反应。通过修 饰其它相关基因，甚至可能让胰岛素分泌受血糖水平的凋节．、 虽然近年来的报道使人振奋，但事实使人们更加认识到嚓隙 Ｂ细胞其结构和功能的复杂，改变几个基因远远不能制造一 个近乎正常的胰腺ｐ细胞。这一领域的突破仍有赖于对３细 胞生长发育生物学的深入研究。 ２．３．２免疫排斥反应的预防：免疫排斥是导致临床胰岛移协 失败的重要原因之一。防止免疫排斥的方法主要有以下几个 方面：（Ｉ）减轻胰岛的免疫源性：制备纯净的胰岛可有效地降 低免疫原性，但目前受大规模纯化胰岛技术所限．其纯度往往 无法达此要求。胰岛的各种物理预处理如低温培养（２４℃）、 冷冻保存（一ｌ９６℃）、紫外线照射及准分子激光照射等均可以 降低其免疫原性；（２）免疫隔离胰岛移植物：主要是指微囊化 技术，即利用人工装置将移植的胰岛和受体的免度系统隔离 的方法。免疫隔离技术是一种克服免疫排斥反应的有效手 段，可以阻止受体的淋巴细胞和抗体对胰岛组织的攻击，而允 许胰岛素和营养物质自由出入。微囊化技术最关键点是寻找 生物相容性好的材料，以避免机体最终的排斥反应．目前认为 海藻酸钠一聚赖氨酸一海藻酸钠是较为理想的村料：（３）抑制 受体的免疫反应：近年来，通过调节移植受体的免疫系统．进 而达到胰岛细胞免疫耐受的研究出现了喜人的成果 ：① 单克隆抗体的应用：移植排斥反应主要以Ｔ淋巴细胞介导的 细胞免疫为主，通过调节Ｔ细胞或抗原提高细胞（３．ＰＣ）表面 的活性物质，可诱导受体对移植物的免疫耐受。Ｒｉｃｏ“ｔｉ等证 明将人胰岛移植给经ＣＤ３或ＣＤ４单克隆抗体处理过的大鼠． 移植的胰岛可长期存活。Ｚｅｎａｐａｘ，ＣＤ 单克隆抗体．ｃｒＬ — ｌｇ等已应用于临床器官移植的抗排斥反应中；②免疫抑制剂 的应用：常规应用的环磷酰胺、类固醇激素、（二ｓＡ、ＦＫ５０６、 ＩＦ 等在同种异体移植中已取得肯定疗效。１９９９年，加拿 刚一 ｍｏｎｔｏｎ的Ｓｈａｐｉｏｒ实验室改良了抗免疫排斥的用药方案．采用 Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ、ＦＫ５０６与雷帕霉素３联免疫抑制方案．并且完全停 用类固醇激素，迄今已取得连续７例胰岛移植的成功、 该 ３联抗免疫排斥药物方案有效地抑制了Ｔ淋巴细胞活性．降
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第２６卷 黑龙江Ｇ 医学 Ｖｏ１．２６．Ｎｏ．１０ ２００２年第ｌＯ期 ＨＥＩ ＬＯＮＧ Ｊ ＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ Ｏｃｔ．２（Ｘ）２ ７３９ 低了白细胞介素２和其它细胞素的产生及其与受体的结合， 限制了淋巴细胞的复制，从而成功地抑制了异体免疫和自身 免疫。由于在整个治疗过程中没有使用糖皮质激素，减少了 化疗对胰岛细胞的损伤并防止引发胰岛素抵抗。 Ｅｄｍｏｎｔｏｎ的实践给临床胰岛移植提供了宝贵经验，其核 心内容如下：①胰岛分离纯化后即刻进行移植；②移植足够数 量的胰岛组织（２名供体）；③采用没有糖皮质激素的药物和 单克隆抗体抑制免疫排斥反应。 尽管目前临床人胰岛移植已获得了巨大进展，但是必须 指出的是：人胰岛分离、纯化过程对其造成损伤的难题仍未能 完全解决。在Ｊａｍｅｓ Ｓｈａｐｉｒｏ的研究报告中亦指出：目前的技 术方法仍需要２只以上胰腺才能纯化获取１名受体所需要的 胰岛数量，而抗免疫排斥治疗方案中使用的Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ （ＦＫ５ｏ６）对胰岛细胞仍有潜在的毒副作用，其抗人胰岛排斥治 疗的远期疗效尚不确切，部分病例需在移植１年后，才可逐步 脱离外源性胰岛素治疗。而胰岛干细胞和胚胎干细胞的研究 虽然获得突破，但距临床应用尚有很大差距。因此．如何在现 有技术方法上改良以获取足够数量且具有完整生物活性的 Ｉｃｃｓ，以及进一步寻求高效、高选择性的新型免疫抑制剂，仍 然是目前胰岛移植领域最迫切需要解决的技术难题。 ３胸腺细胞移植 睾丸问质细胞（ｔｅｙｉ Ｃｅｌｌｓ）是人体合成和分泌雄激素（主 要有睾酮、雄烯二酮及双氢睾酮等）的主要功能细胞。Ｆｏｘ和 Ｂｏｙｌｅ分别在１９７３年和１９７６年报道用小鼠睾丸组织匀浆行近 交系小鼠睾丸问质细胞自体和同种异体移植。Ｊｏ￣ｐｈ 于 １９８９年报道用提纯的大鼠睾丸间质细胞移植到近亲系去势 大鼠体内。学者们希望以此方法给众多低睾酮血症患者提供 种符合生理规律、副作用小的激素补充治疗。 据Ａｎｄｅｒｓｏｎ报道，人Ｌｅｙｄｉｇ氏细胞分离后，细胞的免疫性 很弱，此外，通过移植前体外培养，能进一步降低细胞的抗原 性，延长移植物的存活时间。Ｉ ｄ 氏细胞在体外短期存放 会失去分泌睾酮的能力，但提纯的Ｌ￣ｙａｉｇ氏细胞冻存可继续 保持其一般功能，并对人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）刺激有反 应，可作为长期贮存并维持其功能的简便方法。研究结果显 示：睾丸问质细胞在３℃时，离体４８ｈ内有分泌功能；在２ｌ℃ 时维持内分泌功能；在３７ａｃ时，离体３ｈ内有分泌功能。最近 Ｌｅｅ．Ｍｓ等进行动物实验发现，睾丸问质细胞自体移植于肾包 膜下或腹膜腔后的睾丸酮水平高于皮下或阴囊睾丸床移植。 通过增加移植细胞数量或者利用摄取胶原，睾丸酮产生量可 增加到生理范围。从睾丸组织中分离Ｌｅｙｄｉｇ细胞，再用Ｐｅｒ— ｔｏｌｌ提纯后移植，其效果较睾丸组织匀浆移植为好，血清睾酮 值升高时间明显延长。组织学观察显示移植后４周出现富有 一胸腺是免疫系统中重要的中枢免疫器官，胸腺内上皮性 网状细胞分泌的胸腺素和胸腺生长素对诱导淋巴细胞的发 生、成熟，以及分化都起到重要作用。髓质上皮性网状细胞是 具有分泌功能的最主要的上皮性网状细胞。此外，胸腺皮质 的被膜下上皮性网状细胞（包括暗上皮性网状细胞和哺育细 胞），也具有相当的分泌功能。胸腺机能异常是许多疾病的根 源，包括某些免疫缺陷性综合征（如胸腺先天性发育不全和发 育异常）、自身免疫疾病（狼疮、溶血性贫血）和许多急性或慢 性感染。放免分析证明：血液中胸腺激素的含量随年龄增长 而减少，许多肿瘤的发病率随年龄增长也与胸腺激素水平下 降相平行。Ａａｒｏｓｏｎ等最早证明了胸腺的抗肿瘤作用。胸腺 细胞移植治疗恶性肿瘤的机制：胚胎胸腺细胞移植于人体后 能产生多种胸腺激素，而胸腺激素与机体的免疫功能直接相 关。另外，胸腺激素使来自骨髓的淋巴干细胞分化成为具有 免疫活性的Ｔ细胞，Ｔ细胞以其细胞毒作用和细胞溶解作用 而直接杀伤肿瘤细胞。 机体因免疫缺陷、变态反应而发生许多疾病，例如重症肌 无力、格林一巴利综合征、多发性肌炎、支气管哮喘及牛皮癣 等。许多自身免疫性疾病的发病机制之一就是由于ＣＩ）８不足 和／或ＣＤ４／ＣＤｓ比例失调引起。胚胎胸腺细胞移植不仅可以 增加Ｔ淋巴细胞的数量和活力，而且可以改变ＣＩＰ／ＣＤｓ比例 状态，恢复细胞群间的相互平衡，从而提高细胞免疫功能并限 制变态反应的发生。这就是胚胎胸腺细胞移植治疗免疫缺陷 性疾病和变态反应性疾病的理论基础。 】 用胚胎胸腺细胞移植治疗再生障碍性贫血、恶性淋巴瘤、 小细胞肺癌以及难洽性肾病＂）等疾病均已取得明显的效果。 采用多种免疫组织、细胞移植具有促进免疫效力的作用． 其免疫功能重建的成功率比单独移植为高。临床上可采用胸 腺加骨髓加胎肝进行复合细胞移植，也可采用胸腺加骨髓、胸 腺加胎肝、胸腺加胎肝加胎脾进行复合细胞移植。复合免疫 细胞移植，对细胞免疫功能有明显的增强作用。但被植入的 胚胎胸腺细胞其存活期是有限的，一般在６～１２个月后被排 斥或吸收，因此需反复多次进行移植，以长期维持或增强机体 的免疫功能。 ４睾丸问质细胞移植 对于因各种原因引起的男性性腺功能低下症（低睾酮血 症），临床上多采用人工合成的激素进行替代治疗，但长期使 用睾酮类激素有许多副作用，如肝损害、垂体性腺轴萎缩．也 可能诱发前列腺癌、高血脂症、红细胞增多症等。因此，需要 探索一种新的治疗男性性腺功能低下症的方法。 新生毛细血管的嗜酸性Ｌｅｙｄｉｇ细胞团块。３个月后出现中心 异常钙化的局部炎症性损害变化。超微结构显示，胞核有明 显压迹并有脂褐素，滑面内质网和线粒体的数量减少。体积缩 小。俄国学者ＫｉｒｐａｔｏｖｓｋｉｉＩＤＣ Ｂｊ用新生鼠Ｌｅｙｃｌｉｇ细胞体外培养 后进行同种异体移植，发现其组织结构能维持６个月。我国 学者高新 ］、钱辉军ｎｏｊ等进行了成人睾丸Ｌｅｙａ￣ｇ细胞同种异 体移植的研究，他们将成人睾丸Ｌｅｙｃｌｉｇ细胞移植给男性性腺 功能低下症患者，术后发现患者的血清睾酮水平均明显升高。 但其效果只维持４个月。因此，如何推迟或防止Ｌｅｙｄｉｇ细胞 结构和功能的衰变需作进一步努力。 ５肝细胞移植 肝细胞移植（Ｈｅｐａｔｏｅｙｅ ｔｒａｐｌａｎｔａｆｉｏｎ ｒ￣ＣＴ）是继原位肝移植 后又一治疗急慢性肝功能衰竭、肝脏相关遗传代谢性疾病的 开创性疗法，随着肝脏导向的体外基因治疗的出现，ＨＣＴ又成 为体外基因治疗的重要手段。 ＨＣＴ具有移植技术简单易行、应用灵活，且对受体影响小 等优点。与原位肝移植不同的是，在动物模型中肝细胞移植 只需移植肝组织总量的一部分，即可纠正先天性代谢疾病。 移植４×１０７个肝细胞，约相当于１２局龄大鼠总肝细胞的 ５％，可明显提高急性肝功能衰竭的存活率。对临床移植而 言，这意味着一个供肝可分配给多个受体，从而解决或缓解已 存在的供体短缺问题。肝细胞也可作为原位肝移植前的过 渡，从而使较长时间地等待１个合适的供肝成为可能或者给 自身肝脏再生提供足够的时间。 ５．１肝细胞移植部位的选择 ＨＣｒ除要求足够的移植肝细胞量外，还需要来自门静脉 血的亲肝因子的营养作用水平．以维持异位移植肝细胞的功 能。因此，选择门静脉分布区域作为移植部位成为ＨＣＴ的解 剖学基础。如经脾实质、门静脉、小肠及其系膜作为移植部位 等。移植后存活的肝细胞可表现出清蛋白、多种酶类的合成 与分泌及胆色素的代谢。目前多数学者认为，脾实质是较理 想的移植部位，移植于脾髓的同种异体肝细胞不仅其存活期 长达１８个月，而且形成肝索或假腺泡样结构，可占据脾实质 的４０％，形成“肝化脾”。Ｒａｊｖａｓｈｉ等认为．肝血管床的存在为 经脾ＨＣｒ的供肝细胞提供了一个较大的生存空间，经脾实质 １次可移植１×ｌ０ｓ的肝细胞量，可以满足一般的治疗要求。 Ｇｕｐｔａ等观察到脾内移植的肝细胞随即迁移到受体肝窦内，但 是，其大部分（约７０％）被门静脉血内的巨噬细胞清除，残留 的移植肝细胞在移植后的１６～２０ｈ通过破裂的肝窦内皮进入 肝实质，这些细胞合成血管内皮生长因子及获得细胞膜再生，
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第２６卷 ７４０ ２００２年第１Ｏ期 黑龙江医学 Ｖｏ１．２６．Ｎｏ．１０ ０ｃｔ．２ｏＯ２ ＨＥＩ ＬｏＮＧ ＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ 在移植后３～７ｄ可观察到移植的肝细胞与宿主肝细胞间的缝 隙连接及胆管样结构形成，肝窦内皮的破裂促进移植肝细胞 进入肝实质是其在受体肝内生存的关键因素之一。从营养、 生理及解剖角度上考虑，受体肝脏是移植肝细胞生存的最佳 环境。因此，经门静脉Ｈｃｒ亦是较常选择的途径，这一途径 能使移植的肝细胞经门静脉到达有利于其生存的肝窦内。然 而，经门静脉Ｈｃｒ时其安全性也是需要考虑的内容，这是因 为经门静脉Ｈｃｒ可能导致一些并发症的发生，除如血栓、出 血等并发症外，对门静脉血液动力学亦有影响。如单次大量 经门静脉灌注会对肝组织造成损伤，并随着灌注细胞量的增 加导致急性死亡率增高，而多次少量灌注则无明显肝组织损 伤。Ｋｏｃｋｅｎ等在经门静脉Ｈｃｒ时观察了门静脉血流量的变 化，在狗模型上当移植量达６×１０８～１×１０９时，门静脉血流量 降到原来的２３％～３６％，压力增高到原来的３～４倍。为解决 经门静脉Ｉ－ｔｉＥ时移植肝细胞量受限的问题，Ｐｉｃａｒｄｏ等采用分 离灌注门静脉法，提高了移植肝细胞量，使分布于受体肝内的 移植肝细胞量明显增加（７１％±９％）。腹腔内移植同种异体 或异种肝细胞也可纠正肝功衰竭，但植入的肝细胞易使受体 致敏且大多数细胞在３ｄ内被清除。 ５．２肝细胞移植的免疫排斥反应 免疫学问题仍是Ｈｃｒ面临的主要问题之一。在不使用 免疫抑制剂的情况下，同种异体Ｈｃｒ时，移植肝细胞只能在 受体内生存不到７ｄ。Ｈｃｒ所致的免疫排斥反应发生的快慢 和强弱主要取决于供受体间组织相容性的匹配程度。转基因 动物的应用，方便了免疫学研究。通过检测受体血清中转基 因产物水平，可了解同种异体转基因肝细胞的存活及功能情 况。Ｂｕｒａｇａｎｄｎｅｒ等¨Ｉｊ同种异体转基因肝细胞经脾分别植入Ｂ 细胞缺失、ＣＤ；Ｔ细胞缺失和ＣＷＴ细胞缺失的小鼠受体内， 移植肝细胞分泌的转基因产物１０ｄ左右逐渐消失，而移植入 Ｔ细胞缺失的受体内，长达１６周均可测得转基因产物。因 此，推测ＨＣＴ的排斥反应主要是由Ｔ细胞介导的。在此基础 上，他们又通过ＣＯ４、ＣＯ＂单克隆抗体封闭Ｔ细胞介导的不同 免疫途径，证实了肝细胞具有较高的免疫原性，能引起宿主体 内强烈的由ＣＯ；与ＣＤ Ｔ细胞介导的免疫反应。其中，迟发 型超敏反应起重要作用，而体液免疫反应的程度很微弱。他 们认为，同种异体肝细胞经脾移植后，其表面的ＭＨＣ—Ｉ类分 子所递增的抗原与受体反应Ｔ细胞表面的ＴＣＲ结合，可诱导 Ｔ细胞表达ＦａｓＬ并使之与肝细胞表面的Ｆａｓ受体结合，从而 导致肝细胞凋亡。环孢霉素Ａ能抑制Ｈｃｒ排斥反应，也有可 能是阻断了Ｆａｓ系统介导的凋亡，因为ＣｓＡ能抑制Ｔ细胞表 达ＦａｓＬ。Ｋａｗａｈａｒａ等通过Ｂ７抗体阻断协同刺激信号ＣＤ芦／ Ｂ ，抑制Ｔ细胞的激活；同时，通过ＦａｓＬ单克隆抗体阻断凋亡 信号传递，减轻了排斥反应程度。Ａｔｔａｖａｒ等发现，将同种异体 大鼠肝细胞悬液植入脾脏的同时植入胸腺，可诱发大鼠免疫 耐受，从而不需免疫抑制剂而长期存活，这可能是诱发了中枢 性免疫耐受的结果。 ５．３移植后肝细胞的增殖 如何促进移植肝细胞的增殖，也是广大学者们关心的问 题。研究表明，宿主肝脏特异性损伤后产生的肝再生刺激可 促进移植肝细胞增殖。此现象最初在Ｄ一半乳糖胺诱发的急 性肝功衰竭鼠模型中发现。Ｌａｃｏｎｉ等［１２］先用倒千里光碱（ｒｅｔ— ｒｏｓｉｎｅ）抑制宿主肝细胞分裂，再行７０％肝部分切除，此条件下 移植肝细胞的增殖能力极度活跃，２个月后达到宿主肝细胞 量的５ｏ％以上。 实验表明，重组人类ＨＧＦ（ｒｈＨＧＦ）可促进移植肝细胞增殖。 然而ｒｈＨＧＦ价格昂贵，限制了其临床应用。肝细胞刺激物质 （ＨＳＳ）是一类能刺激肝细胞增殖生长的活性物质。有人发现， 间断静脉给予ＨＳＳ可促进经ＣＣｌ４诱导的肝硬化鼠脾内移植肝 细胞的增殖；肝硬化的严重程度可加强ＨＳＳ对移植肝细胞的增 殖刺激作用。人类ＨＳＳ可通过生物技术从胎肝组织中制备，使 得ＨＳＳ向临床推广成为可能。另外，胰岛素、上皮生长因子 （ＥＧＦ）、转化生长因子一ａ（ＴＧＦ—ａ）等，均有促进肝细胞增殖的 作用。这些活性物质的作用均是器官特异性而非物种特异性。 在日后Ｈｃｒ的临床应用中有可能发挥其作用。 ５．４肝细胞移植临床应用 在家族性高胆固醇血症ＷＨＩ－ＩＬ兔模型的研究基础上， Ｇｒｏｓｓｍａｎ等成功地为１例家族性高胆固醇血症患者进行了自 体肝细胞移植肝基因治疗。术后，患者ＬＤＩＭＨＩ）Ｌ由术前的１Ｏ ～１３降至５～８，至报道时为止，治疗效果已平稳维持１８个 月。随后，他们又对５例纯合型家族性高胆固醇血症患者进 行了类似的治疗。移植后５例患者均取得了良好的近期疗 效，其中，３例４个月问持续性ＬＤＬ一胆固醇降低，最明显者下 降达２０％。 Ｃｒｉｇｌｅｒ—Ｎａｉｉｌｉｌ＂综合征是由于肝脏缺乏胆红素一ＵＤＰ葡萄 糖醛基转移酶（ＢＵＧＴ）活性而致胆红素代谢障碍的一种隐性 遗传病。Ｆｏｘ等 ｌ ］在超声引导下，对１例Ｃａ＇ｉｇｌｅｒ—Ｙａｊｊａｒ综合 征患儿经皮穿刺门静脉输注同种肝细胞（７．５×１０９，约占宿主 肝细胞５％）。移植后７ｄ，患儿肝脏呈现出ＢＵＧＴ活性，是移植 前的１４倍。连续４周观察，血清胆红素降至相对安全水平， 胆汁中出现结合胆红素，同时，光疗从每天１２ｈ减少到平均每 天６ｈ。１年后，该患儿仍维持较低胆红素水平，黄疸明显减 轻。Ｈｃｒ对该患儿的疗效证明，移植的异体人肝细胞也可在 受体内长期存活、保持功能，并发挥对代谢性疾病的治疗作 用。 Ｓｔｒｏｍ等 ｌ ］对５例属Ⅳ期肝性脑病和多系统器官衰竭的 患者通过介入导管经脾动脉植入肝细胞。５例患者在ＨＣＴ 后，等待肝移植之前的２～１０ｄ，撤除大部分药物治疗仍能维 持正常脑血液灌注和心功能稳定，肝损伤生化指标显著改善， 血氨明显降低。其中，１例遗传性ａ．一抗胰蛋白酶缺陷患者 在Ｈｃｒ术后表现ａ．一抗胰蛋白酶活性。通过免疫组织化学 和电镜技术分析其中１例死亡患者的脾脏，证实了移植肝细 胞在脾内种植。最近，Ｂｉｌｉｒ等通过脾动脉导管插入术向６例 肝硬化患者输注了１×１０９～１０×１０９至１００亿个冷藏肝细胞， ３例患者还进行了２次Ｈｃｒ。移植后所有患者肝性脑病症状 消失，Ｃｈｉｌｄ—Ｐｕ小评分增高，其中３例达Ｃｈｉｌｄ Ａ级，并且无１ 例接受静脉输注清蛋白或新鲜冷冻血浆。ＨＣＴ ６个月后对１ 例患者的肝组织活检，进一步证实了功能性肝细胞移植物已 发挥作用。 Ｈｃｒ历经２ｏ余年的研究，已从动物模型阶段开始进入初 步临床实验，在治疗肝功能衰竭及多种肝脏相关遗传代谢性 疾病方面蕴涵着巨大的潜能。相信在新的世纪中，Ｈｃｒ将成 为人类治疗肝病的新选择。 ６中枢神经系统细胞移植 在过去的十几年里，动物实验资料表明：神经系统的细胞 移植能恢复及保护某些神经功能，从而使其可能发展成为治 疗人类神经变性疾病的一种手段。帕金森病（Ｐａｒｋｉｍｏｎ ｄｉｓ— ｅａｓｅ）患者的临床试验表明，胎儿多巴胺能神经元移植物能在 人脑中存活并能产生功能效应。这些事实奠定了神经细胞移 植治疗帕金森病的基础。在动物模型研究的基础上，已开展 纹状体神经组织移植治疗亨廷顿病（Ｈｕｎｄｎｇｔｏｒｌｓ ｄｉｓｅａｓｅ）患者 的尝试。由于该疾病症状十分严重而缺乏有效的治疗方法， 从而推动了这一领域研究的发展。细胞移植在其它一些神经 变性疾病治疗中，如阿尔茨海默症（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、肌萎缩 性脊髓侧索硬化及遗传性共济失调等方面的应用还尚未成 熟。要使神经细胞移植成为有效的临床治疗手段，不仅需要 在动物模型中继续进行深入的研究，而且还要对临床受试病 人进行准确的评价。【ｌ５ｊ ７干细胞的研究 胚胎干细胞（Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＥＳ）是一种源于早期胚 胎组织并能够被诱导生成机体各种类型的细胞，具有自我更 新能力的多（全）能干细胞。目前，已成功建立小鼠、金黄地 鼠、猪，乃至人类的胚胎细胞系。ＥＳ自发现起就受到生命科
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第２６卷 ２ＯＯ２年第ｌ０期 黑龙江医学 Ｖ０１．２６．Ｎｏ．１０ 艇Ｉ Ｌ０ＮＧ ＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ Ｏｃｔ．２００２ ７４ｌ 学各领域的关注，并在探讨个体胚胎发育、畸变及致畸机制、 发现人类的新基因及基因功能研究、药物开发、细胞组织及器 官移植、基因治疗等领域，具有极为广阔的应用前景。 ＥＳ不同于其他细胞系的２大特征：①具有多向分化潜 能，即具有象早期胚胎组织细胞那样的多（全）能性，能够被诱 导生成机体各种类型的细胞；②具有体外培养细胞系的特征， 可以在体外不断扩增。 ＥＳ具有分化成机体３个胚层组织细胞的能力，这一点无 论是在动物还是人类的体内外实验中均已被证实。在一定条 件下ＥＳ可被定向诱导形成内皮、骨、软骨 平滑肌、心肌、骨骼 肌、神经胶质、原始神经节及复层鳞状上皮细胞。这种在体外 培养体系中能不断扩增而又能定向诱导分化的ＥＳ，无疑是细 胞、组织，甚至器官移植供体的理想来源。特别是在那些仅仅 由一种或少数几种细胞死亡或功能失调所致疾病，如帕金森 病、糖尿病、骨关节炎、风湿性关节炎、白血病、再生障碍性贫 血、中风、心肌病等。ＥＳ可望为这些疾病提供一种有效的根 治手段。有实验表明，体外定向诱导可使ＥＳ生成造血干细 胞，进一步在体内分化则可生成各种血细胞、Ｔ细胞和Ｂ细 胞，这一研究结果提示，ＥＳ可作为造血干细胞的来源用于白 血病、再生障碍性贫血的造血功能重建及免疫缺陷病的免疫 重建ｕ刮。另外，尚有诱导ＥＳ生成神经元、神经胶质细胞、胰 岛细胞、肝细胞等，从而用于神经退行性疾病、糖尿病、肝硬化 等的细胞移植治疗的实验研究ｌｌ 。 ８细胞三维培养与组织工程 毒和伦理的制约。但值得欣喜的是，人类胚胎干细胞和组织 干细胞的研究进展为从根本上解决制约组织工程的种子细胞 提供了可能性［Ｉ９］。可以预见，随着干细胞及组织工程学研究 的不断深入，细胞移植的应用前景将更为广阔。 参考文献 ［１］宋纯，宋春芳．人胚胎甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁 腺功能低下症［Ｊ］．中华外科杂志，２ＯＯＯ，３８：６９０—６９２． ｛２ＪＲｉｅｏｒｄｉ Ｃ，Ｉ＿ａｍｙ ＰＥ，Ｆｉｎｋｅ ＥＨ，ｅｔ Ｏ１．Ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｎｕｍ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｓｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，ｌ９８８，３７（４）： ４１３—４２Ｏ． ［３］ｌ（８ ＤＢ，Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ ＪＲ，Ｋｏｆｆｒｏｎ Ａ，ｅｔ ｏ１．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｐａｎｃ ｌ舾一ｋｉｄｎｅｙ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ ｍｏｆｅｔｉｌ／ ｔａｃｍｌｉｍｕｓ ｅＨｌ：ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｂｌａｄｄｅｒ ｄｒａｉ旭 ｔｏ ｎｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｅｎｔｅｒｉｃ ｄＩ 瑾ｌｇｅ［Ｊ］．Ｓｕｒｇｅｒｙ，２０００，１２８ （４）：７２６—３７． ［４］Ｒｏｓｓｉｎｉ ＡＡ，Ｇｒｅｉｎｅｒ ＤＬ，Ｍｏｒｄｅｓ ＪＰ，ｅｔ ｎｚ．ｎｄｕｃＩｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍ— ｍｕｎｏｌｏｇｉｃｔｏｌｅｒａｎｃｅｆｏｒｔｍｎｓｐｌａｎｔａｉｔｏｎ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｖ，１９９９，７９（１）： ９９～１４１． ［５］Ｓｌ￣ｐｉｍ ＡＭＩ，ｌａｋｅ／Ⅱ【Ｔ，Ｒｙａｎ ＥＡ，ｅｔ ｏ１．Ｉｓｌｅｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ— ｔｉｏｎ ｉｎ ｓｅｖｅｎ ｐａｌｉｅＩｌｔｓ ｉｔｗｈ ｔ），】ｐｅ ｌ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔ￣ｌｌｓｉｎｇ ａ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉ— ｃｏｉｄ—ｆｒｅｅ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｒｅｇｉｍｅｎ【Ｊ］．Ｎ Ｅｎｇ Ｊ Ｍｅｄ，２ＯＯＯ，３４３ （４）：２３０—８． ［６］叶启发．器官移植临床指南［Ｍ］．北京：科学出版社， １９９９．２３４． 组织工程学是２ｏ世纪８ｏ年代末期发展起来的一门新兴 边缘学科。这门交叉学科的核心是综合应用工程学和生命科 学的基本原理和技术，在体外构建具有生物功能的人工替代 物，用于修复组织缺损，替代失能或衰竭的组织、器官的部分 或全部功能。在组织的生长发育过程中，不同的细胞在特定 的环境中按预定的程序定向分化并装配成与其功能相适应的 三维结构。组织工程的基本原理在于应用生物学的理论和工 程学的方法，在对细胞进行体外培养的过程中，模拟体内组织 发生的环境条件，诱导和维持细胞分化并形成特定的三维结 构。这一过程的发展依赖于对细胞分化机制的揭示和材料科 学的发展。 ［７］郭汉林，肖冰莲．胸腺细胞移植治疗难治性肾病５例 报告［Ｊ］．中华器官移植杂志，１９９０，ｌ１（４）：１５６—１５７． ［８］Ｋｉｒｐａｔｏｖｓｋｉｉ ＩＤ，ＤｅｎｄｅｂｅｌＯ＇Ｖ ＥＳ．Ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌ— ｔｕｒｅｄ ｎｅｏｎａｔａｌ ａｎｄｒｏｇｅｎ—ｐｗｄｕｃｉｎｇ ｙｄｉｇ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｖｅｓｔｎ Ｒｏｓｓ Ａｋａｄ Ｍｅｄ№ｕＩ【，１９９４，（４）：４２—６． ［９］高新，詹炳炎，张孝斌．睾丸间质细胞移植的实验与 临床研究［ｃ］．全国第二届器官移植大会论文汇编，１９９４．２２． ［１０］钱辉军，詹炳炎．同种睾丸Ｌｅｙ￣．ｓ细胞移植治疗男 性性腺功能低下症［Ｊ］．中华器官移植杂志，１９９６，１７（３）：１０５ 一ｌ０ｒ７． 【ｌ１］Ｂｕｍｇａｎｄｎｅｒ ＧＬ，Ｌｉ Ｊ，Ｈｅｉｎｉｎｇｅｒ Ｍ，ｅｔ ｏ１．Ｉｎ ｖｉｖｏｉｍ— ｍｍｍｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅｐａｔｏ— 目前组织工程的基本方法主要包括：（１）体外设计和培养 人体组织，用于通过移植手术替换或修复病变组织；（２）体外 构建含有功能细胞或不含细胞的替代物，用于植入体内诱导 功能组织的再生；（３）构建基于人体工程组织的植入型或外置 型装置，用以替代病变的组织或器官。其中，除了不含活细胞 成分的纯生物活性材料外，工程组织、器官的功能主要依赖于 其中的功能细胞（实质细胞）的分化表型，而功能细胞表型的 正确表达有赖于对细胞分化的定向诱导和分化表型的维持。 功能细胞与细胞外基质和／或间质细胞形成特定的三维结构 有利于功能细胞的诱导分化和分化表型的维持。细胞三维培 养，一方面能够为体外培养细胞提供与其组织来源相似甚至 相同的细胞生长微环境和细胞联系，从而既有利于各类细胞 的定向分化诱导，又有利于细胞分化表型的维持和细胞增殖； 另一方面可望在体外构建与各类组织、器官相应的细胞三维 生长类似物或等同物。因而细胞三维培养已成为组织工程学 中的关键技术，组织工程的发展将在很大程度上取决于细胞 三维培养技术的进步【ｌ引。 细胞是体外构建工程组织、器官最为重要的材料。从组 织工程学的应用角度出发考虑，用于体外构建工程组织、器官 的细胞需满足以下３个基本前提：（１）具有特定的分化表型或 定向分化潜能；（２）可靠的细胞来源；（３）不引发移植排斥反 应。目前用于体外构建工程组织、器官的细胞按其来源分为 自体细胞、同种异体细胞和异种细胞３类。这３类细胞均不 能同时满足上述的３个基本要求。其中自体细胞存在来源严 重短缺的限制；同种异体细胞同时存在着来源受限和移植排 斥反应的问题；异种细胞存在移植排斥反应、传染动物源性病 ｃｙｔｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｍｅｄｅＸＪ］．Ｔｒａｎｓｐｌｎｔａａｔｉｏｎ，１９９８，６５：４７—５２． 【１２］Ｌａｃｏｎｉ Ｅ，Ｏｒｅｎ Ｒ，Ｍｕｋｈｏ—ｐａｄｈｙａｙ ＤＫ，ｅｔ ｎｚ．Ｌｏｎｇ— ｔｅｒｍ ｎ￣１Ｉ．＇Ｋ．—ｔｏｔａｌ ｌｉｖｅｒｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｂｙｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｉｔｏｎ ｏｆｉｓｏｌａｔｅｄ ｈｅｐ．． ａｔｏｃｙｔｅｓ ｎｉ ｍｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｔｒｏｒｓｉｎｅ【Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１９９８，１５３： ３１９—３２９． ［１３］Ｆｏｘ ＩＪ，Ｒｏｙ ａ，Ｋａｕｆｍａｎ ＳＳ。ｅｔ ｏ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｒｉｇｌｅｒ－Ｎａ￣ａｒ ｓ）１ｌ由删 ｔｙｐｅ ｌ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｔｍｍｐｌｎｔａａｉｔｏｎ￣Ｊ］． Ｎ Ｅｒ珥Ｊ Ｍｅｄ，１９９８，３３８：１４２２—１４２６． 【１４］Ｓｔｒｏｍ ＳＣ，Ｆｉｓｈｅｒ ＲＡ， ｌ０ｔｒＩｐｓｏｎ ＭＴ，ｅｔ ｏ１．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｔｒａｎｓｐｌｎｔａａｔｉｏｎ ａｓ ａ ｂｒｉｄｇｅ ｔｏ ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｅｎｎｉ— ｎａｌ ｌｉｖｅｒｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｐｌｎｔａａｉｔｏｎ，１９９７，６３（４）：５５９—６９． ［１５］苏泽轩．现代移植学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社， １９９８．８２８． 【１６］Ｎａｋａｎｏ Ｔ．ＬｙｍｐｈｏＭｍｍｔｏｐｏｉｅｉｔｃ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ｅｍｂｌｆ— ｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｎｉ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．１ｍｍｕｎｏｌｏｇ，１９９５，７（３）：１９７—２０３． 【ｌ７］Ｖｅｏｏｖｓｉ ＡＬ，Ｐａｒａｔｉ ＥＡ，Ｇｆｉｔｔｉ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｏ，￣ｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｕｍａｎ ＣＮＳ ｎｄ ｅｓｔａａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆｔｍｍｒａａｎｔａｂｌｅ ｈｕｍａｎ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｂｙ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅ印Ｎｅｕｒａｌ，１９９９，１５６（１）：７１—８３． ［１８］Ｌｌｔｌｌ￣ｒ Ｒ，Ｖａｃａｎｔｉ ＪＰ．Ｔｔｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９３．２６ｏ：９２０—６． 【１９］Ｈｅａｔｈ ＣＡ．Ｃｅｉｌｓ ｆｏｒｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ｎｏｌ，２０Ｏ０，１８（１）：１７—９． （编辑：谢忠艳） （收稿日期：２ＯＯ２—０５—１８）
