杨桥中学校长 杨桥高中录取分数线
和合学-渔父李煜
2023年3月3日发(作者：洗碗的碗怎么写)选修一2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案
制作人:使用人:姓名:____________班级:_____________效果:_____________
【学习目标】
1.研究选择培养基对微生物的选择作用。
2.用稀释涂布平板法对微生物进行计数。
预习案
一、研究思路
1.筛选菌株
尿素是一种重要的农业___肥,但不能直接被农作物吸收利用,只有当土壤中的细菌将尿素分
解成___之后,才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成______。
反应式为：___________________________________________。
(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于___________生长的条件(包括营养、_____、
pH等),同时_____或_____其他微生物生长。
(2)选择培养基:在微生物学中,将允许__________的微生物生长,同时_____或_____其他种类
微生物生长的培养基,称做____________。
思考1：分解尿素的细菌的培养基配方中，为微生
物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
答：碳源：______________氮源：___________。
思考2：此配方有什么特点？该培养基对微生物是
否有选择作用？如果有，是如何进行选择的？
答：特点：____________。_______，_________
________________________________________。
(3)选择培养基的类型：
①利用培养基的特定化学成分分离特定微生物。
②通过某些特殊环境分离微生物。
③通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的。
④依据某些微生物对某种物质的抗性。
【辨一辨：下列例子属于哪一种类型的选择培养基？】
①当尿素是唯一氮源时,可抑制不能利用尿素的微生物生长,使能够利用尿素的微生物生存,
从而分离出能分解尿素的微生物。
利用培养基的_____________________分离特定微生物。
②在高温环境中可分离得到耐高温的微生物,其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生
存。
通过某些____________________分离微生物。
③培养基中若缺乏有机碳源,则异养微生物无法生存,而自养微生物可利用空气中的CO
2
制造
有机物。
通过改变培养基的___________________达到分离微生物的目的。
④在培养基中加入青霉素,可抑制细菌、放线菌的生长,从而分离得到酵母菌和霉菌。
依据某些微生物对某种物质的__________。
2.统计菌落数目
(1)常用来统计样品中活菌数目的方法是_________________。即当样品的稀释度足够高时,
培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的____________。通过统计平板上的
____________,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在
__________的平板进行计数。计算公式：__________________________。
该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数_____。这是因为当两个或多个细胞在一起时,平板
上观察到的只是______菌落。
(2)_____________________也是测定微生物数量的常用方法。
(3)如何统计菌落数【见探究案】
3.设置对照
(1)设置对照的主要目的是排除实验组中_____________对实验结果的影响,提高实验结果的
_________。
(2)对照实验是指除了_________的条件以外,其他条件都______的实验,其作用是比照
__________,排除任何其他可能原因的干扰,证明确实是__________的条件引起相应的结果。
(3)设置对照组的4种方法：空白对照、条件对照、自身对照和相互对照。（了解）
二、实验设计
实验设计包括对实验方案,所需仪器、材料、用具和药品,具体的___________以及时间安排等
的综合考虑和安排。某土壤样品中细菌的分离与计数实验的操作步骤如下。
1.土壤取样
土壤中的微生物70%~90%是_____,绝大多数分布在距地表________的近_____性的潮湿土
壤中。
2.样品的稀释
样品的________将直接影响平板上生长的菌落数目。通常选用一定稀释范围的样品液进行培
养,以保证获得菌落数在_______之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量,一般选用
_______________倍的稀释液进行平板培养。第一次实验时,可将稀释范围放宽一点,以保证能
从中选择出适于计数的平板。
3.微生物的培养与观察
不同种类的微生物,往往需要不同的培养_____和培养______。细菌一般在__________的温度
下培养1~2d,放线菌一般在25~28℃的温度下培养______,而霉菌一般在__________的温度
下培养3~4d。
每隔______统计一次菌落数目。选取______________时的记录作为结果,以防止因
______________而导致遗漏菌落的数目。
一般来说,在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间),同种微生物表现出
_________________。菌落的特征包括菌落的__________________________和______等方面。
三、对分离得到的分解尿素的细菌的鉴定
1.检测pH的变化
在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的______将尿素分解成了____。氨会使培养基的碱
性_______,pH______。因此,可以通过检测培养基_____的变化来判断该化学反应是否发生。
2.利用指示剂
在以______为_____氮源的培养基中加入________指示剂,培养某种细菌后,如果pH升高,指
示剂将变_____,说明该种细菌能够__________。
探究案
【探究：如何统计菌落数目】
三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基
中，得到以下三个结果：
甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为290，故细菌数为2.9×109。
乙同学在该浓度下涂布了一个平板和一个空白平板，统计的菌落数为230和0，根据公式计
算得出细菌数为2.3×109。
丙同学在该浓度下涂布了三个平板和一个空白平板，统计的菌落数为21、212、256和0，
求得细菌数为1.63×109。
思考：这三个同学的做法正确吗？为什么？
答：
甲同学________，_______________________________________________________________。
乙同学________，_______________________________________________________________。
丙同学________，_______________________________________________________________。
课堂练习
1.下列不属于菌种计数方法的是()
A.平板划线法B.稀释涂布平板法
C.显微镜直接计数法D.滤膜法
2.为了判断选择培养基是否起到了选择作用,需要设置的对照是()
A.未接种菌液的选择培养基B.未接种菌液的牛肉膏蛋白胨培养基
C.接种了菌液的牛肉膏蛋白胨培养基D.接种了菌液的选择培养基
3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为104的培养基中,得
到以下几种统计结果,正确的是()
A.涂布了1个平板,统计的菌落数是230
B.涂布了2个平板,统计的菌落数是215和260,取平均值238
C.涂布了3个平板,统计的菌落数分别是21,212和256,取平均值163
D.涂布了3个平板,统计的菌落数分别是210,240和250,取平均值233
4.使用选择培养基的目的是（）
A.培养细菌B.培养真菌
C.使需要的微生物大量繁殖D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别
5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）
A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物D.高浓度食盐
训练案
（满分100分，建议用时30min。选择题每题5分，填空题如无特殊说明每空4分）
1.在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长
的培养基称做()
A.鉴别培养基B.加富培养基C.选择培养基D.基础培养基
2.下列关于土壤取样的叙述,错误的是()
A.土壤取样,应选取肥沃、湿润的土壤B.先铲去表层土,再取样
C.取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D.应在火焰旁称取土壤
3.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()
2
PO
4
、Na
2
HPO
4
、MgSO
4
·7H
2
O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
2
PO
4
、Na
2
HPO
4
、MgSO
4
·7H
2
O、葡萄糖、琼脂、水
2
PO
4
、Na
2
HPO
4
、MgSO
4
·7H
2
O、尿素、琼脂、水
2
PO
4
、Na
2
HPO
4
、MgSO
4
·7H
2
O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
4.能够测定样品活菌数的方法是()
A.稀释涂布平板法B.显微镜直接计数法C.重量法D.比浊法
5.下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是()
A.微生物培养前,需对培养基进行消毒
B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法
C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度
D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一的氮源
6.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述,其中错误的是()
A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,经高温、高压灭菌后倒平板
B.取104,105,106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL,分别涂布于各组平板上
C.将实验组和对照组平板倒置,37℃恒温培养24~48h
D.确定对照组无菌后,选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
7.下列属于菌种鉴定重要依据的是()
A.细菌的大小、形状和颜色B.菌落的大小、形状和颜色
C.有无鞭毛D.培养基的不同
8.若大肠杆菌和圆褐固氮菌混合在一起,采用下列哪组培养基可将它们分离?()
A.加食盐的培养基和牛肉膏蛋白胨培养基B.伊红美蓝培养基和无氮培养基
C.斜面培养基和液体培养基D.加青霉素的培养基和液体培养基
9.(32分)有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染
的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株,请回答下列问题。
(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲,该
培养基属于培养基。
(2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即___________________________
和。
(3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株降解原油的
能力。
(4)通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、
和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。
10.(28分)请回答下列与大肠杆菌有关的问题。
(1)大肠杆菌的同化作用类型是。
(2)下表是某公司研发的一种检测大肠杆菌菌群的培养基的配方。
成分含量/g
蛋白胨10.0
乳糖
5.0
蔗糖5.0
K2HPO42.0
显色剂
0.2
琼脂12.0
将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL
根据用途划分该培养基属于(填“选择”或“鉴别”)培养基。该培养基中的碳源是(6分)。
(3)统计大肠杆菌数目时,常用的计数方法是显微镜直接计数法和,为防止杂菌污染,需对培养
基和培养皿进行。
(4)现有1L水样,用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中,依次稀释到103稀释
度。各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养,一段时间后记录的菌落
数分别为55,56,57,则每升原水样中大肠杆菌数为。
训练案参考答案：选择题每题5分，填空题如无特殊说明每空4分
1-5CCAAA6-8DBB
9.(1)原油选择
(2)平板划线法稀释涂布平板法
(3)强
(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰
10.(1)异养型
(2)鉴别乳糖、蔗糖、蛋白胨(6分)
(3)稀释涂布平板法灭菌
(4)5.6×108(6分)