荧光酶标仪
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2023年3月18日发(作者：东京印象)MitoTracker®RedCMXRos线粒体红色荧光探针使用说明
货号:M9940
规格:50μg
保存:-20℃避光干燥保存。
产品说明：
MitoTracker®RedCMXRos是一种细胞渗透型的X-rosamine衍生物，包含标记线粒体的弱巯
基反应性的氯甲基官能团。本品是一种氧化型的红色荧光染料（Ex=579nm，Em=599nm），
只需简单孵育细胞，即可被动运输穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。一旦线粒体被染
色后，还能根据后续实验的需求进行固定（醛类固定剂如甲醛）和透化（醛类去污剂如Triton
X-100），探针依然维持在细胞内。本品适合双标实验，因其红色荧光与其他的绿色荧光探
针具有良好的分辨率。
虽然传统的线粒体荧光探针如TMR和罗丹明123，也能很容易的聚集在功能线粒体上，但是
一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉，从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量
状态影响因子的实验中，使其应用大受限制。
产品性质：
CAS号（CASNO.）：167095-09-2
分子式（Formula）：C32H32Cl2N2O
分子量（Molecularweight）：531.52
外观（Appearance）:紫色固体
激发波长（Ex）:579nm
发射波长（Em）:599nm
结构式（Structure）:
使用方法
1.储存液的配制
本品是以粉末形式提供，使用前需将本品回温至室温。之后使用细胞培养级别的无水DMSO
将其充分溶解至终浓度1mM。本品.=531.52g/mol，换算下来，50μg粉末只需加入
94μLDMSO即可得到1mM储存液。
可根据单次的使用量将储存液分装后放到-20℃避光，避免反复冻融。
2.工作液的配制
根据不同的实验目的使用不同的探针浓度，以下的起始操作条件仅作参考，可根据细胞类型
和其他的相关因素如细胞或组织的透化等进行适当调整。
用适当的缓冲液或者细胞培养基稀释1mM储存液至工作液浓度。一般推荐使用浓度为25-500
nM。对于后续需要做固定或透化的样本，推荐工作浓度为100-500nM，为了降低过度加载导
致的潜在伪影和线粒体毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外，浓度
过高也可能对其他细胞结构进行染色。
3.染色及检测
1）贴壁细胞的染色
培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度，吸除培养
液，加入37℃预热的MitoTracker®RedCMXRos染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下
孵育15-45min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，使用新鲜培养液或缓冲液替换上述
染色液，即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。或者进行后续的固定和透化
步骤，见步骤4。
2）悬浮细胞的染色
离心收集细胞，吸除上清，利用37℃预热的MitoTracker®RedCMXRos染色工作液轻轻重悬
细胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，
离心收集细胞，利用37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞，被染色的细胞可用流式细胞
仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。
如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前先用多聚赖氨酸（poly-D-lysine）包被
载玻片或盖玻片。或者进行后续的固定和透化步骤，见步骤4。
4.固定和透化
1）染色结束后，利用培养液或缓冲液清洗细胞。
2）小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固
定。经验证，本染料MitoTracker®RedCMXRos由含3.7%甲醛的完全培养液于37℃孵育
内皮细胞15min能起到良好的固定效果。
3）清洗细胞：吸除固定液，用适当缓冲液冲洗细胞数次。
4）细胞透化（可选）：
像ICC等实验需要细胞要做透化，则可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如TritonX-100
的缓冲液中孵育。透化结束后，用缓冲液清洗细胞即可进行后续ICC实验。经检测，利用含
0.2%TritonX-100的PBS孵育内皮细胞10min可以达到良好的透化效果。
另外，还可利用预冷的丙酮透化5min，之后用PBS清洗细胞。经验证，即使后继没有进一
步的抗体标记，丙酮透化处理也可降低背景信号。
注意事项
1、DMSO有毒，使用时请小心操作。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。