高压蒸汽灭菌
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2023年3月16日发(作者：破十法计算题)高压蒸汽灭菌技术及培养基的灭菌
任务验收标准
1.了解加压蒸汽灭菌的原理及应用范围；
2.掌握高压蒸汽灭菌的操作流程和技术要点，学会使用高压蒸汽灭菌锅；
3.掌握高压蒸汽灭菌器的安全使用注意事项。
工作任务
1.熟悉高压蒸汽灭菌锅的结构及工作原理；
2.用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌。
以小组为单位将配制好的培养基适当包扎、正确装入高压蒸汽灭菌锅，进行灭菌。
任务指导
高压蒸汽灭菌操作
1.灭菌过程
(1〕加水
使用前在外层锅内加人适量的水，水量与三角搁架相平为宜，不可过少，否则易将灭菌
锅烧干引起爆炸事故。
(2)装锅、加盖
将内锅放在三角搁架上。培养基分装完毕后(分装参看项目四)，将待灭菌的物品放在内
锅里。放置不要过满，以免妨碍蒸汽流而影响灭菌效果。盖锅盖时将盖上的排气软管插到内
锅的排气槽内，然后将锅四周的固定螺旋以两两对称的方式旋紧。打开排气阀。
(3)加热排气
加热井同时打开排气阀，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，维持5min以上，
以排除锅内冷空气，然后将排气阀关闭。如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，
务必使空气充分排除。
(4)保温保压
当压力升至，温度达到121℃时，应控制热源、保持压力，维持20--30min后，
隔断热源，让灭菌锅自然降温。
(5)出锅
当压力表降至“0”处后。打开排气阀，随即旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物。注意:
切勿在锅内压力尚在“0”以上时开启排气阀，否则会因压力骤然降低，而造成培养基剧烈
沸腾冲出管口或瓶口，污染棉塞，以后培养时引起杂菌污染。
灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。将做好的斜面、平板、培养基等置于37℃恒
温箱中培养1-2天，确定无菌后方可使用。
(6)高压灭菌锅保养
灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及搁架干燥，盖好锅盖。
2.注意事项
(1)凡被灭菌的物品，在灭菌过程中应能直接接触饱和水蒸气，才能灭茵完全。密闭的
干燥容器不宜用本法灭菌，因为容器内只能受到短时间(例如121℃、20min)的干热，达不
到灭菌效果。
(2)灭菌器内安放的物品不能过满，以便蒸汽流动畅通;包装不宜过大，装量过大的培养
基，在一般规定的压力与时间内灭菌不彻底。
(3)当灭菌时，灭菌器内冷空气务必排尽，否则，压力表上所示的压力为热蒸汽和冷空
气的混合压力，致使表压虽达到规定值，但温度相差很大，影响灭菌效果。
(4)在灭菌时，加压或者放汽减压，均应使压力缓慢上升或下降。以免瓶塞陷落、冲出
或玻瓶爆破。
(5)凡在灭菌器的压力尚未降至“0”位以前，严禁开盖，以免发生事故。
思考题
1.高压蒸汽灭菌开始之前。为什么要将锅内冷空气排尽？
2.灭菌完毕后.为什么要待压力降到“0”时才能打开排气阀，开盖取物？
3.在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素？