放线菌图片
鲜茧茧层含水率-会计顶岗实习周记
2023年2月23日发(作者：东阁大学士)微生物实验报告
放线菌的形态观察实验
刘欣怡2
生物科学基地班
组别：周一下午三组
同组者：曹平平，周楠，
刘艺，刘希伟
实验完成时间：2012年11月5号
一、实验目的
1．学习并掌握观察放线菌形态的基本方法——插片法。
2．了解放线菌的形态特征。
3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
4.掌握配制高氏一号培养基的一般方法。
二、实验器材
1．.菌种：
青色链霉菌，弗氏链霉菌。
2．试剂及培养基：
酒精溶液，用来配制高氏I号培养基的淀粉、氯化钠、琼脂、水、硝酸钾、
硫酸亚铁、硫酸镁、磷酸氢钾等。
3．仪器或其他用具：
培养皿，盖玻片，锥形瓶，酒精灯，火柴，载玻片，接种环，镊子，显微镜
等。
三、实验原理
1．放线菌
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基
内菌丝(简称“基丝”)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝
(简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝
而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝
较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，
放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。
能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的
重要依据。
放线菌的孢子丝形状和孢子排列情况是放线菌分类的重要依据。
2.插片法观察放线菌
将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培
养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置
于载玻片上直接镜检。
这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期
的形态。
3.高氏I号营养培养基
高氏I号营养培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合
成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作
用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成
分，甚至有时还需要将两中或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，
合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。
4、补充其它方法：
a.玻璃纸法
玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将
放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭
下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。
这种方法既能保持放线菌的自然生长，也便于观察不同生长期的形态特征。
b.印片法
将要观察带放线菌带菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法
主要用于观察孢子丝带形态、孢子带排列及其形状等。
该方法简便、但形态特征可能有所改变。
四、实验内容
从本实验所提供的两种菌，即青色链霉菌和弗氏链霉菌，选择一种菌或者两
种菌都选，用接种环无菌操作将培养好的菌接种到倒好的平板上，而且划平板接
种，然后在垂直划线的方向上插入盖玻片，每个培养基中插入三个盖玻片，然后
放置在28摄氏度的恒温环境中培养7天，然后镜检，观察放线菌的形态特征（一
个培养基上接种一种细菌）。
五、实验步骤
1、配制高氏一号培养基：
根据高氏一号培养基的配方（配制1000ml），首先计算配制200ml高氏一号
培养基所需各成分的用量，除了量非常少的物质用分析天平称量外，其余的物质
均用电子天平称量。用小烧杯取200ml去离子水，将称量好的的物质放入去离子
水中，搅拌溶解。调节pH，然后加入称量好的琼脂再倒入300ml锥形瓶中，加
塞并用纸绳子绑上牛皮纸。
2、器材及培养基进行灭菌：
将盖玻片十个一组用牛皮纸包成一包，包时一个盖玻片折一下牛皮纸，一共
包6包。将包扎好的器具以及配置好的培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌。
3、取出灭好菌的器材和培养基，冷却：
将灭好菌的器具和培养基取出，放入柜子中，不打开牛皮纸等下周实验时用。
4、倒平板：
将上周准备好的培养基取出，除去牛皮纸并拔松棉塞，放在电炉子上加热融
化。全部融化好后，从电炉子上取下锥形瓶，稍稍冷却（放在桌子上并轻轻摇动）
后用凉水冲洗，冲洗过程中不断摇晃培养基使其均匀受冷。等到培养基锥形瓶瓶
底的温度降到手可以承受的范围内后，点燃酒精灯，无菌操作向灭好菌的培养皿
中倒入培养基，尽量使其厚一些。将培养皿平放在桌面上静置等其凝固完全。翻
转倒置。
5、取菌、接种、划线：
运用接种环，现在酒精灯上灼烧2遍，然后无菌操作从斜面培养基中取菌，
接着无菌操作在倒好的平板上划线，划线要密集。完成后，用记号笔在培养皿盖
上做一下标记，记录划线方向。然后写好标签，区分实验小组并标明接种的是什
么菌。
6、镊子消毒：
将镊子浸泡在酒精溶液中一段时间，使用时取出现在火焰上灼烧，再去夹取
灭好菌的盖玻片。
7、插入灭菌的盖玻片
用消毒镊子夹取盖玻片，可以平行边缘夹其一端，在酒精灯旁边打开培养皿，
从镊子均匀用力沿垂直划线方向插入盖玻片，盖玻片和培养基表面夹角约为45
度，如下图所示。
（约45度角）
每一个培养皿中插入三个盖玻片，零散分布，如下图所示。
8、放置培养
将插好盖玻片的培养基倒置，放置在28摄氏度的恒温箱中培养7天。
9、取出插片
将镊子在酒精灯火焰上灼烧后，稍稍冷却，然后在酒精灯旁打开培养基平皿
盖，用镊子夹取插入到培养基中的盖玻片，闭合培养基平皿盖。
10、放置于载玻片上
可以先擦净取出的盖玻片的一面，然后擦净的一面朝下即有菌一面朝上，将
盖玻片放置在载玻片中部；也可以不进行擦盖玻片操作，直接将盖玻片放置于载
玻片中部即可。
11、镜检
将放置好盖玻片的载玻片放在显微镜的载物台上进行观察。先用10倍物镜
进行观察，找到目标观察物后移至视野中央，换用40倍物镜接着观察。如若换
用油镜，需要将盖玻片的有菌一面朝下放置在载玻片上，擦净的一面朝上，并向
该面滴加香柏油，然后用油镜观察。
12、记录并为下次实验做准备
记录实验结果并拍下所观察到的细菌，仪器归位，洗干净手，进行下次实验
的准备工作。
六、实验结果及记录照片
1.实验结果记录表
菌丝形态特征
项目基内菌丝形态气生菌丝形态孢子丝形态
弗氏链霉菌略短，较密，多分枝厚絮状直条状
2.实验结果记录照片(本组)：
本图片为弗氏链霉菌观察视野记录图。图中可以同时观察到弗氏链霉菌的基丝、
气丝和孢子丝，但是基丝不是很清楚。下面是该图的局部放大图。
孢子丝气丝基丝
（较直）（较粗且色深）（较细且色浅）
孢子丝
该视野放大后的图中可以清楚地看到弗氏链霉菌的孢子丝，且能大致看到其孢子
的形态，椭圆或长圆形。
3.实验结果手绘图
见最后附页。
七、实验结果分析
1、插片法：
把盖玻片插入到接种放线菌并划线的平板培养基中，放线菌会沿着盖玻片与
培养基交界的区域生长到盖玻片上，因此经过培养后，取出所插盖玻片，直接观
察盖玻片即可观察到自然状态下的放线菌菌丝，而且实验中观察到的菌丝就是菌
丝的正常形态。
2、观察放线菌基丝、气丝和孢子丝：
放线菌的菌丝分化为两部分，即长入培养基内的营养菌丝（又称基内菌丝）
和生长于培养基表面的气生菌丝（又称繁殖菌丝）。其中，在显微镜观察视野中，
基内菌丝外观透明且较细，而气生菌丝外观较暗且相对较粗。
由于培养方法的限制，观察菌丝时只能大体根据菌丝的颜色和形状来大体判
断区分基内菌丝和气生菌丝。
但是观察时孢子丝比较容易找到，对于我们本次所选择的实验材料弗氏链霉
菌，其孢子丝形态比较直，也比较容易观察，而且在高倍镜下就能观察到孢子，
如果换用油镜能清楚地进行观察，比如可以看到弗氏链霉菌的孢子呈椭圆形或
者长圆形，表面光滑。
3、在同一个玻片上观察基丝和气丝：
因为基丝和气丝不在同一个视野中，所以必须仔细调节显微镜的微调进行观
察，否则不易观察到。
八、实验注意事项
1、在用炉子加热上周灭好菌的培养基时，一定要先把牛皮纸取下，并且向上
拔松瓶塞，以防加热时瓶内气体膨胀、气压过大而冲出瓶口。
2、用炉子加热上周灭好菌的培养基时，注意不要离锥形瓶太近，以防培养基
沸腾冲出瓶口烫伤自己。
3、倒平板的操作中，要使平板厚一些，便于下面插片。
4、平板划线要密集。
5、用镊子夹取盖玻片要小心，不要用力过大，把盖玻片夹碎。
6、镊子在使用前，要先浸泡在酒精溶液中，然后取出在火焰上灼烧。
7、镊子在酒精灯上不要灼烧太久，以免烫手。
8、平板划线后，可以用记号笔稍做标记，记录划线方向，以免把盖玻片插入
所划线的空中进而导致实验失败。
9、盖玻片要垂直划线插入培养基中。
10、盖玻片要倾斜大约45度角插入培养基中。
11、盖玻片可以随意平行分布在培养基中，不要插在同一条线上，可以有前
后或左右的位置变化。
12、可以拿消毒并灼烧好的镊子在平板上轻轻划一条短线，便于插入盖玻片。
13、进行放线菌制片时，要减少空气流动，避免自己吸入孢子。
14、在插片过程中，注意在移动附着有菌体的盖玻片时切勿碰动菌丝体，必
须有菌一面朝上，以免破坏菌体丝形态。
15、观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。
16、如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。
17、培养放线菌要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中要
特别注意无菌操作，以免杂菌污染。
18、因为在盖玻片的两边都会长有放线菌，所以可以在取出盖玻片后，擦净
一面的菌，这样便于观察。
19、用10倍或40倍镜观察玻片；若用油镜观察玻片，必须将盖玻片的一面
擦干净，然后有菌面朝下放置在载玻片上，将香柏油滴加在擦净的那面上。
20、取出插片后，要将培养放线菌的平皿及时盖上盖子，以免造成污染。
21、若想在一个片子中观察到基丝和气丝，需要调整微调，因为两者不在同
一个视野中。
22、实验结束后，洗净手。
23、实验结束后，仪器拔下电源并归位。整理实验台。
九、实验思考题
1．镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝？
答：气生菌丝直生或分枝丝状，较基内菌丝粗，是指从基质伸向空气中的菌
丝体。菌类的菌丝体多是匍匐在基质上，或是贯通基质而伸长的，为了孢子的形
成而生长气生菌丝。在一定条件下，水生菌类也可以生长气生菌丝。真菌和放线
菌的营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外并伸向空间的菌丝称为气生菌丝。
它叠生于营养菌丝上，以致可以覆盖整个菌落表面。在光学显微镜下，颜色较深，
直径比营养菌丝粗，直形或弯曲，有的产生色素。在固体培养基上霉菌的菌丝分
化为营养菌丝和气生菌丝。营养菌丝深入到培养基内吸收养料；气生菌丝向空中
生长，有些气生菌丝发育到一定阶段分化成繁殖菌丝，产生孢子。
2.弗氏链霉菌和青色链霉菌的孢子丝有何区别？
答：青色链霉菌的孢子丝为螺旋形，而弗氏链霉菌的孢子丝为直线形。
3、观察放线菌培养特征时从哪些方面进行观察？
答：气生菌丝的颜色（指孢子丝和孢子成熟前的颜色，即菌落和菌苔四周的
颜色）；孢子丝及孢子的颜色（菌落中央的颜色）；基内菌丝的颜色（指菌落和菌
苔背面的颜色）；可溶性色素的颜色（指渗入到培养基内的色素颜色）；气生菌丝
呈现的状态（如粉状、绒状和棉絮状，有无同心环等）；菌落特征（如表面光滑，
皱折，崎岖等）。
十、实验小结
本实验包括放线菌的培养与观察，掌握了放线菌的培养方法，了解了放线菌
菌丝及孢子丝的自然生长形态特征。在实验过程中，要注意划线时要紧密，插片
时要垂直于划线，保证菌种能着生在盖玻片上；显微观察时宜用略暗光线，使菌
丝更容易观察；操作过程中勿碰动菌丝体，以免影响菌丝的自然状态；制片时，
要尽可能使菌面朝上，以免破坏菌丝体。实验的关键步骤和注意事项是影响实验
结果的主要因素，所以要做好充分预习，对实验方法及实验操作要明确。
通过本次试验，我学会了放线菌形态观察的方法，在实验的过程中不仅掌握
了插片法等微生物实验操作技术，而且也了解一些关于放线菌的基本知识，如其
菌丝形态、颜色等等。当然，我在实验的过程中也遇到了一些操作上的问题，比
如一开始没能在一个片子中观察到基丝和气丝，但在向老师寻求帮助后，我明白
了操作的漏洞，即没有通过调节微调来观察基丝和气丝，也明白了这样操作的原
因，即显微镜观察中的基丝和气丝不在同一个观察视野。
最终我们小组顺利完成了本次实验，我相信从本次实验中学到的知识和操作
技术以及得到的经验将会对以后的微生物学习大有裨益。
十一、参考文献
沈萍陈向东.微生物实验[M].4版.高等教育出版社
十二、附录
高氏I号培养基（1000mL）
可溶性淀粉20g
KNO
3
1g
NaCl0.5g
K
2
HPO
4
0.5g
MgSO
4
0.5g
FeSO
4
0.01g
琼脂20g
水1000mL
pH7.2~7.4
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅
拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。121摄氏度灭菌。