细菌试验
关于梦想的名言警句-斗轮机
2023年2月19日发(作者：我的前半生简介)微生物实验报告细菌
微生物实验报告
职称级专业实验者学号组员讲师
一、实验目的
2022例临床标本和脓液中病原菌的检测
1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方
法。2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。3.了解并比较细菌在固体、半
固体和液体培养基的生长特征。4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备和革兰氏染色方法，熟悉不同类型细菌的基本形态。6.掌
握糖发酵实验、抗生素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理和方法。7.从脓液和粪便样本
中分离、培养和检测病原体。
二、实验器材
1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、
试验台
管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体
体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒
3.细菌分离培养：脓液标本、粪便标本、曙红亚甲基蓝平板、营养琼脂平板、接种环、
酒精灯、打火机
4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基
5.细菌形态检测：倾斜培养、营养液、生理盐水、镜油瓶、擦镜纸、吸水纸、玻片、
显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰氏染色试剂、液体培养基
6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、
菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血
浆、生理盐水
7.细菌血清学检测：玻片、福氏志贺氏菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯
三、实验方法与步骤
1.培养基的制备
称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→
用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌
2.空气和人体表面的细菌学检查2.1空气的细菌学检查
每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边
→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
2.2人体体表细菌学检查
甲方和丙方定期洗手，乙方和丁方洗手标准。A、B、C和d分别共用一个盘子。按下
图将细菌接种在普通平板上的手指上，第一格为洗手前，第二格为洗手后，第三格为消毒
后，第四格为空白对照。
3.细菌的分离培养3.1实验方法
平板划线法：在划线的帮助下，多种混合细菌分散成平板表面的单个细菌，并固定在
某一点上。培养后，细菌分裂并繁殖，形成可见的细菌群（单个菌落）。3.2实验步骤
接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做
两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营
养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板
倒置37℃培养18～24h→观察结果。4.细菌的纯培养
A.→普通板→金黄色蚁群→1斜面B→普通板→阿不思，怀特→1斜面C→EMB
板→萎缩性紫癜→1斜面D→EMB板→粉红殖民地→1斜面
斜面正面上2/3作标记：组号+金黄、白色、紫黑、粉红。5.细菌的形态学检测5.1
革兰试剂染色
5.2显微镜油镜的使用步骤
10×物镜→看清标本→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中→模糊物象→细调节调焦，
观察物像→记录结果→关闭电源→擦镜纸拭去香柏油→擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）
用混合液体擦拭→用透镜擦拭纸擦拭油镜。5.3肉汤接种法
接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在
接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞
好棉塞→35℃培养4~6小时
6.细菌生化试验6.1细菌糖发酵试验
接种针烧灼灭菌→用灭菌接种针分别刮取实验所得到的紫黑色和粉红色菌苔→分别接
种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内→接种环烧灼灭菌→将微量管平放在平板内
→37℃培养过夜后→观察结果。6.2药敏实验
接种环的烧灼消毒→取上一实验中获得的四种细菌溶液，在普通平板上密集涂抹
（如图6所示）→接种环的烧灼消毒→马克：绿色，头和青→镊子火焰消毒→青霉素、
头孢曲松、庆大霉素纸糊→按→用镊子排毒→37℃倒置培养进行6.3凝固酶实验
取干净玻片一张→在左右两边分别滴加兔血浆1-2滴，生理盐水1滴→接种环烧灼灭
菌→冷却→分别用接种环取之前实验所得到的白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆
研磨混合→边混匀边观察结果→接种环烧灼灭菌→稍等片刻，观察结果6.4动力实验
烧灼并消毒接种针→用接种针分别在紫黑色和粉色斜面上接种细菌→从半固态介质
的中心垂直穿孔，以到达近底部的管，但不要到达管的底部→沿原路线退出接种针→快
速通过试管口