2024年4月2日发(作者：)
临床化学分析方法选择与评价
本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。
一、对试剂及试剂盒的选择
（一）对试剂的要求
为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。
（二）对试剂盒的要求
对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。
二、实验方法和标准品的选择
实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即： 决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。
（一）标准品的分级
标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。
（二）实验方法选择的要求和步骤
在进行方法学选择时要注意它的要求和步骤，国际临床化学协会（ IFCC ）提出：常规方法应具有实用性和可靠性两方面的性能指标；至于某一项具体分析方法所应具有的性能标准，可由临床化学家根据采用这一试验的目的决定。
1. 检验方法的实用性和可靠性
检验方法的实用性主要考虑，第一微量快速，加样量不要太大；第二便于操作，不要进行过多人工处理；第三使用安全，不产生过多的医疗废物垃圾；第四费用低廉。 可靠性是指检验方法 一般具有较高的精密度和准确度， 以及较大的检测能力。有时因为标本在几百个上千，对它的检测能力也有特殊要求 。
2. 方法选择的步骤
方法选择的步骤，实验室应该选择什么样的方法，能够达到自己的质量目标通常有三个步骤，第一， 广泛查阅文献 ，根据要求对已发表的各种方法进行比较与分析，确定哪些方法有充分的科学根据及使用价值。第二， 选定候选方法 ，初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，要熟悉该法的原理、性能指标及相应的条件等。第三， 进行初步评价 ，为了使用的目的，初试应包括候选方法所有的性能指标。比如精密度、测量范围、参考区间等。
三、评价实验与分析误差类型的关系
评价实验与分析误差的类型的关系，方法学评价的基本内容是通过实验途径测定并评价方法的精密度与准确度；不论精密度还是准确度，强调的都是误差，评价实验的过程就是对误差的测定。方法评价的各项实验是配合检测各种类型的分析误差而设计的。
（一）精密度评价
精密度评价，重复性试验，重复性试验的方法是将同一份试验样品分成数份，进行多次分析测定，目的在于考察候选方法的偶然误差。随机误差越小，精密度越好。在做精密度评时，样品的选择可以采用标准液、质控物、病人标本或混合血清均可，视其用途而定。 分
析物浓度的选择：进行重复性试验的被测物浓度，宜选择在医学决定水平，因为，这种浓度在临床分析实验结果时最有用处。 应至少评价两个水平的重复性。精密度评价除了重复性以外，可以当天完成。它的重现性在不同的实验室间可以体现出来。对于一个实验室来说我们还要测定它的中间精密度，即改变时间，测量的时间可以在 5 ～ 20 天内完成测定，由不同的人操作，最后算一下精密度结果。通常情况下每天可以测 2 个浓度水平的样本，各 2
批次，每批次内重复测定 2 次，结果收集以后剔除一些离群值，然后再计算批内变异和总变异。
（二）准确度的评价
1. 回收试验
回收试验也是生化检验进行评估的一项很有效的手段，分析方法正确测定加入常规分析样本中的纯分析物的能力。目的是测定比例系统误差以衡量候选方法的准确性，回收试验是一个比较老的方式，但是非常有效。
2. 干扰试验
干扰试验是用来评价候选方法的准确度，在加入一定浓度干扰物的条件下形成的是恒定系统误差，干扰物浓度不同，误差大小也不同。
3. 方法比对试验
方法对比试验，用于检测候选方法的系统误差。通常包括比例和恒定两种系统误差。分析样本的选择，收集不少于 40 份的新鲜患者血清。如用一份血清量过少需要混合血清时，可使用两个患者的混合血清，也就是说不要将大多数人的血清混在一起，这样有时可以对有些分析物造成过分的稀释。 分析物浓度的选择：浓度应在对应方法的检测范围之内，并尽量覆盖高、中、低各水平。 试验方法：在不少于 5 天时间内，每日分别用对比方法和实验方法测定 8 份样本，样本浓度随机分布，每份样本测定两次，测定顺序为： 1 ～ 8 和 8 ～
1 。
四、方法学性能标准及其制定
方法学性能标准及其制定，方法学性能标准有哪些？性能标准（ PS ）也称分析目标，应根据不同的应用目的（筛选、诊断、预后、监测）而异。允许分析误差： 95% 样品的允许误差限度；医学决定水平：临床判断结果具有意义的被分析物浓度。
（一）性能标准的制定
制定的性能标准，既应反映临床应用与解释结果的要求（称为医学效用限度），又应基本符合实验室所能达到的技能状态。需要由临床医学家和临床化学家共同研究制定。 使用单值判断指标：单值判断指标较简单，在评价过程中用于初步估量。 使用可信区间判断指标：可信区间判断指标比较复杂，但能对方法性能提供更客观的决定，起最后判断作用。
（二）诊断性试验的选择
对于诊断性试验的选择，诊断性试验必须具备灵敏度和特异度两个基本特征，理想的诊断试验是具有较好的敏感性和特异性，不会出假阳性和假阴性，这种诊断性报告比较理想。所以诊断性试验的要求比较高。
1. 临床敏感度（ % ）
什么是临床敏感度？临床敏感度又称为真阳性率，通常认为检测为阳性的病人数，除以理论上为阳性的病人数，比如患病人群里认为这个指标都是阳性，我们的试验结果能检查出多少，敏感度越高说明越不容易漏诊。
2. 临床特异度（ % ）
临床特异性又称真阴性率，在全部受检的非病人的结果中，检测结果是阴性的有多少，这个数量做比值，就是真阴性率。
（三）参考区间
参考值（参考区间）：在参考人群中抽样（参考个体）进行测定，由此得到的均数及其分布范围；这个结果的分布只能作为它所代表人群的判断参考。
1. 参考值的确定
参考区间的确定指一个地区的健康人群中，规定若干条标准，在总体中抽样进行调查测定，将测定结果经统计学处理求出均值和标准差；对于结果呈正态分布的项目，通常将均
值± 2SD 定为参考区间；对于结果非正态分布的项目，根据临床需求，选择单侧 5% 或双侧 2.5% 的百分位数值作为参考区间。
2. 参考区间的确定
各实验室应根据自己所选用的方法确定本实验室的参考区间，此时需要至少 120 例健康人；如引用试剂说明书、手册、指南或权威文献中提供的数据作为本室的参考区间时，应进行验证，此时需要 20 ～ 50 例健康人。如果验证的结果与文献报道的不一致，要增加验证数量，必须在 120 例以上。
（四）医学决定水平
医学决定水平，临床按照不同病情给予不同处理的指标阈值。实验室的结果达到一定水平以后，临床就要采取不同的干预措施。待诊值：提示需要进一步检查的阈值；确诊值：提示需要采取治疗措施的临界值；危急值：提示需要紧急处理的界值。
五、诊断试验的评价指标
诊断性试验的评价指标包括哪些？一，诊断性试验要具有良好的灵敏度和特异度；二，阳性似然比，阳性似然比指诊断试验的真阳性率与假阳性率之比值，即阳性似然比=灵敏度/（1-特异度）；三，阴性似然比=1-灵敏度/特异度。
（一）评价指标
在评价指标里还有阳性预测值和阴性预测值，它们可以随患病率发生变化，它们在指导临床医生做诊断时有很大的帮助，但是不能作为评价诊断试验本身的指标。阳性预测值等于患病率和灵敏度的积除以 患病率×灵敏度 +（1-特异度）×（1-患病率）。
（二）受试者工作曲线
在工作中经常遇到受试者工作曲线，也是进行方法学评价的很重要的一个工具。在诊断指标中以敏感度（真阳性率）对 1- 特异度（假阳性率）作图，并将相对的点连接起来所得到的曲线称为受试者工作曲线（ ROC 曲线）。 ROC 曲线的作用：选择合适的诊断阈值。比较两种不同诊断方法的可靠性，靠近左上角的 ROC 曲线所代表的方法较好。
（三）新诊断试验的统计要求与评价
诊断试验的统计要求与评价，对于新的诊断方法，除专业要求外，还必须符合统计学要求。诊断试验一般分定性和定量两种，临床化学检验大多为定量诊断试验。衡量一个新的计量资料试验，必须具备线性范围、精密度、准确度、稳定性、比对试验和参考区间等统计学要求。我们做诊断性试验的进行评价时候， 与金标准进行同步盲法比较；观察对象的代表性（实验分组） 是不是合理 ；样本量的大小 要符合要求 ；诊断试验的重复性。 观察指标的判断标准是否合理；诊断试验的真实性联合试验的评价；诊断试验的具体步骤；诊断试验的实用性。
